Transposition-based method for the rapid generation of gene-targeting vectors to produce Cre/Flp-modifiable conditional knock-out mice.
Transposition-based method for the rapid generation of gene-targeting vectors to produce Cre/Flp-modifiable conditional knock-out mice.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0004341
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发表时间：
2009
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Savilahti H
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Turakainen H;Saarimäki-Vire J;Sinjushina N;Partanen J;Savilahti H
条件基因靶向策略逐渐用于研究基因功能组织特异性和/或在一个特定的时间段。所有这些策略的工具是目标载体的产生，任何简化程序的方法都是非常有益的。我们描述了一种全面的基于转位的策略，以产生用于小鼠条件等位基因产生的基因靶向载体。该系统采用通用克隆载体和两个定制的mini-Mu转座子。它直接从BAC克隆中产生靶向结构，并且产生的等位基因可以被Cre和Flp重组酶修饰。我们通过修改两个小鼠基因Chd22和Drapc1来证明该方法的适用性。这种直接的策略应该很容易适用于高通量靶向载体生产。
Conditional gene targeting strategies are progressively used to study gene function tissue-specifically and/or at a defined time period. Instrumental to all of these strategies is the generation of targeting vectors, and any methodology that would streamline the procedure would be highly beneficial. We describe a comprehensive transposition-based strategy to produce gene-targeting vectors for the generation of mouse conditional alleles. The system employs a universal cloning vector and two custom-designed mini-Mu transposons. It produces targeting constructions directly from BAC clones, and the alleles generated are modifiable by Cre and Flp recombinases. We demonstrate the applicability of the methodology by modifying two mouse genes, Chd22 and Drapc1. This straightforward strategy should be readily suitable for high-throughput targeting vector production.
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