Steady-state kinetics of the hypoxanthine phosphoribosyltransferase from Trypanosoma cruzi.
Steady-state kinetics of the hypoxanthine phosphoribosyltransferase from Trypanosoma cruzi.
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克氏锥虫次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶的稳态动力学。
DOI：
10.1016/j.bbapap.2004.03.009
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发表时间：
2004
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Craig,SydneyP
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Wenck,MaryAnne;Medrano,FranciscoJ;Eakin,AnnE;Craig,SydneyP
分析了克氏锥虫次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶（HPRT）催化反应的动力学机理，以确定设计寄生虫特异性机制的HPRT抑制剂的可行性。结果表明，T. Cruzi遵循基本上有序的Bi-Bi反应，并且像其人类对应物一样，也可能与嘌呤底物和产物焦磷酸盐形成死端复合物。计算拟合的动力学数据的多个初始速度方程得到的结果是一致的，当次黄嘌呤或鸟嘌呤结合形式的酶结合焦磷酸盐，而不是磷酸核糖焦磷酸底物的生产正向反应的死端复杂。采用有限的蛋白水解消化为死端复合物的形成提供额外的支持，并估计正向和反向反应底物的Kd值。由于与人HPRT的动力学机制相似，本文报道的结果为T. Cruzi等人指出，设计一种基于机制的锥虫HPRT抑制剂，其也不会抑制人类酶，可能是困难的。然而，结果还表明，锥虫HPRT的有效选择性抑制剂可以通过设计结合嘌呤碱和焦磷酸盐的部分的类似物的双底物型抑制剂来实现。
The kinetic mechanism for the reaction catalyzed by the hypoxanthine phosphoribosyltransferase (HPRT) from Trypanosoma cruzi was analyzed to determine the feasibility of designing a parasite-specific mechanism-based inhibitor of this enzyme. The results show that the HPRT from T. cruzi follows an essentially ordered bi–bi reaction, and like its human counterpart also likely forms a dead end complex with purine substrates and the product pyrophosphate. Computational fitting of the kinetics data to multiple initial velocity equations gave results that are consistent with the dead end complex arising when the hypoxanthine- or guanine-bound form of the enzyme binds pyrophosphate rather than the phosphoribosylpyrophosphate substrate of the productive forward reaction. Limited proteolytic digestion was employed to provide additional support for formation of the dead end complex and to estimate the Kdvalues for substrates of both the forward and reverse reactions. Due to similarities with the kinetic mechanism of the human HPRT, the results reported here for the HPRT from T. cruzi indicate that the design of a mechanism-based inhibitor of the trypanosomal HPRT, that would not also inhibit the human enzyme, may be difficult. However, the results also show that a potent selective inhibitor of the trypanosomal HPRT might be achieved via the design of a bi-substrate type inhibitor that incorporates analogs of moieties for a purine base and pyrophosphate.
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DOI：
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