Real-time monitoring of caspase cascade activation in living cells.
Real-time monitoring of caspase cascade activation in living cells.
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DOI：
10.1016/j.jconrel.2012.05.044
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发表时间：
2012-10-10
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Chen X
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhu L;Huang X;Choi KY;Ma Y;Zhang F;Liu G;Lee S;Chen X
我们介绍了一种简单，通用和强大的一步技术，使实时成像的多个细胞内的caspase活性在活细胞中，而不需要复杂的合成协议。传统的荧光探针或最近报道的可活化探针已被设计为靶向各种蛋白酶，但限于细胞外分子。只有少数已被应用于活细胞中的细胞内蛋白酶的图像，因为大多数这些探针具有有限的细胞渗透性。我们的平台不需要复杂的合成过程;相反，它涉及简单的肽合成和与商业转染剂的简单混合步骤。转染剂有效地提供了高度淬灭的荧光探针，包括独特的染料和淬灭剂对，在MDA-MB-435细胞中的启动caspase-8和效应caspase-3，允许双重成像的活动，这两个caspase在凋亡过程中诱导的肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）。通过多种荧光探针的组合，这个简单的平台可以应用于选定的细胞内蛋白酶的多重成像，以研究病理学中的凋亡过程或用于药物发现的基于细胞的高通量筛选系统。
We introduce a simple, versatile and robust one-step technique that enables real-time imaging of multiple intracellular caspase activities in living cells without the need for complicated synthetic protocols. Conventional fluorogenic probes or recently reported activatable probes have been designed to target various proteases but are limited to extracellular molecules. Only a few have been applied to image intracellular proteases in living cells because most of these probes have limited cell-permeability. Our platform does not need complicated synthetic processes; instead it involves a straightforward peptide synthesis and a simple mixing step with a commercial transfection agent. The transfection agent efficiently delivered the highly quenched fluorogenic probes, comprised of distinctive pairs of dyes and quenchers, to the initiator caspase-8 and the effector caspase-3 in MDA-MB-435 cells, allowing dual-imaging of the activities of both caspases during the apoptotic process induced by TNF-related apoptosis induced ligand (TRAIL). With the combination of multiple fluorogenic probes, this simple platform can be applied to multiplexed imaging of selected intracellular proteases to study apoptotic processes in pathologies or for cell-based high throughput screening systems for drug discovery.
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