Methods for siRNA-mediated reduction of mRNA and protein expression in human placental explants, isolated primary cells and cell lines.
Methods for siRNA-mediated reduction of mRNA and protein expression in human placental explants, isolated primary cells and cell lines.
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DOI：
10.1016/j.placenta.2008.10.003
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发表时间：
2009-02
期刊：
影响因子：
3.8
通讯作者：
Westwood, M.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Forbes, K.;Desforges, M.;Garside, R.;Aplin, J. D.;Westwood, M.
关键词：
利用RNA干扰（RNAi）从细胞或组织中去除单个蛋白质，彻底改变了我们对基因功能的研究能力。胎盘是一个有吸引力的研究目标，其中特定蛋白质的作用可以与细胞培养模型和离体绒毛组织进行比较，在离体绒毛组织中可以维持生理功能。在这项研究中，我们比较了各种市售试剂和方法，以确定有效递送siRNA至胎盘细胞的方法。随后使用靶向胎盘碱性磷酸酶（PLAP）的siRNA序列测试使用荧光标记的siRNA优化的方案，选择该siRNA序列是因为其在滋养层中的高丰度。使用qRT-PCR测定mRNA丰度，并使用免疫定位检查对蛋白质的影响。我们报告说，不同的协议需要BeWo绒毛膜癌细胞（核转染），原代细胞滋养层细胞（脂质为基础的转染）和绒毛组织外植体（核转染）。这些结果为在这三种人胎盘模型中进行最佳siRNA介导的敲除提供了指导。
The use of RNA interference (RNAi) to deplete individual proteins from cells or tissue has revolutionised our ability to characterise gene function. The placenta is an attractive target for studies in which the role of specific proteins can be compared with cell culture models and explanted villous tissue where physiological function can be maintained ex vivo. In this study, we compared a variety of commercially available reagents and approaches to define methods for efficient delivery of siRNA to placental cells. Protocols optimised using fluorescently-labelled siRNA were subsequently tested using siRNA sequences that target placental alkaline phosphatase (PLAP), chosen because of its high abundance in trophoblast. mRNA abundance was assayed using qRT-PCR, and the effect on protein was examined using immunolocalisation. We report that different protocols are required for BeWo choriocarcinoma cells (nucleofection), primary cytotrophoblast cells (lipid-based transfection) and villous tissue explants (nucleofection). The results provide guidelines for optimal siRNA-mediated knockdown in these three models of the human placenta.
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影响因子：
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作者：
Crocker, I. P.;Arthur, P.;Baker, P. N.
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