Localization, implications for function, and gene expression of chymotrypsin-like proteinases of cytotoxic RNK-16 lymphocytes.
Localization, implications for function, and gene expression of chymotrypsin-like proteinases of cytotoxic RNK-16 lymphocytes.
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细胞毒性 RNK-16 淋巴细胞胰凝乳蛋白酶样蛋白酶的定位、对功能的影响和基因表达。
DOI：
10.1016/0304-4165(88)90095-5
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发表时间：
1988
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Hudig,D
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zunino,SJ;Allison,NJ;Kam,CM;Powers,JC;Hudig,D
大鼠RNK-16白血病细胞杀伤YAC-1，YAC-1是啮齿动物自然杀伤淋巴细胞裂解的细胞。我们在RNK-16致密颗粒中发现了类糜蛋白酶(‘Chymase’)活性，该颗粒也具有细胞溶解活性。与RNK-16类胰蛋白酶活性相比，三种不同类型的丝氨酸蛋白酶抑制剂选择性地抑制了该酶的活性。选择性的抑制剂是真菌醛乳糜抑素，氯甲酮Z-甘氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-CH2Cl，以及基于机理或‘自杀’的抑制剂7-amino-4-chloro-3-(2-phenylethoxy)isocoumarin.这些蛋白水解酶抑制剂也阻断了RNK-16颗粒介导的细胞溶解。可逆的抑制素可以延迟颗粒介导的细胞溶解，而不可逆的氯甲酮和异香豆素酶抑制剂则完全阻断颗粒介导的细胞溶解。这两种不可逆抑制物对凝乳酶活性表现出双相抑制，表明颗粒中至少存在两种凝乳酶。Northern印迹分析发现，RNK-16mRNA与小鼠细胞毒性T淋巴细胞丝氨酸蛋白酶基因CCPI的一个cDNA探针发生了强杂交。这些数据表明，细胞毒颗粒中的凝乳酶活性对细胞溶解功能是重要的，很可能属于一个新的丝氨酸蛋白酶亚家族。
Rat RNK-16 leukemia cells kill YAC-1, which are the cells lysed by rodent natural killer lymphocytes. We found chymotrypsin-like proteinase (‘chymase’) activity in the RNK-16 dense granules that also contain cytolytic activity. The chymase activity hydrolyzed the thiobenzyl peptide substrate Suc-Phe-Leu-Ohe-SBzl and, in comparison to RNK-16 tryptase activity, was selectively inhibited by three different types of serine proteinase inhibitors. The selective inhibitors were the fungal aldehyde chymostatin, the chloromethylketone Z-Gly-Leu-Phe-CH2Cl, and the mechanism-based or ‘suicide’ inhibitor 7-amino-4-chloro-3-(2-phenylethoxy)isocoumarin. These proteinase inhibitors also blocked RNK-16 granule-mediated cytolysis. Chymostatin, a reversible inhibitor, delayed granule-mediated cytolysis, whereas the irreversible chloromethylketone and isocoumarin proteinase inhibitors completely abrogated granule-mediated cytolysis. The two irreversible inhibitors displayed biphasic inhibition of the chymase activity, indicating that at least two chymases are present in the granules. By Northern blot analysis, we found that RNK-16 mRNA hybridized strongly with a cDNA probe of CCPI, a mouse cytotoxic T lymphocyte serine proteinase gene. These data imply that chymase activity in the cytotoxic granules is important for cytolytic function and is likely to belong to a new subfamily of serine proteinases.
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D. Hudig
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10.1016/0006-291x(87)90490-6
发表时间：
1987
影响因子：
3.1
作者：
Hudig,D;Gregg,NJ;Kam,CM;Powers,JC
通讯作者：
Powers,JC