Active site alanine mutations convert deubiquitinases into high-affinity ubiquitin-binding proteins.
Active site alanine mutations convert deubiquitinases into high-affinity ubiquitin-binding proteins.
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DOI：
10.15252/embr.201745680
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发表时间：
2018-10
期刊：
影响因子：
7.7
通讯作者：
Wolberger C
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Morrow ME;Morgan MT;Clerici M;Growkova K;Yan M;Komander D;Sixma TK;Simicek M;Wolberger C
探索去泛素化酶（DUB）在不同途径中的生物学作用的一种常用策略是研究用细胞中催化无活性突变体取代野生型DUB的效果。我们在这里报道了一种普遍研究的DUB突变，其中催化半胱氨酸被丙氨酸取代，可以显着增加一些DUB对泛素的亲和力。因此，这些紧密结合突变体的过表达有可能隔离单泛素和泛素链的细胞池。因此，表达这些突变的细胞可能表现出与DUB活性丧失无关的不可预测的显性负性生理效应。与游离泛素结合的SAGA DUB模块的结构揭示了Ubp8C146A对泛素具有30倍高亲和力的结构基础。我们发现另一种选择，用精氨酸取代活性位点半胱氨酸，可以使dub失活，同时也降低了对泛素的亲和力。
A common strategy for exploring the biological roles of deubiquitinating enzymes (DUBs) in different pathways is to study the effects of replacing the wild‐type DUB with a catalytically inactive mutant in cells. We report here that a commonly studied DUB mutation, in which the catalytic cysteine is replaced with alanine, can dramatically increase the affinity of some DUBs for ubiquitin. Overexpression of these tight‐binding mutants thus has the potential to sequester cellular pools of monoubiquitin and ubiquitin chains. As a result, cells expressing these mutants may display unpredictable dominant negative physiological effects that are not related to loss of DUB activity. The structure of the SAGA DUB module bound to free ubiquitin reveals the structural basis for the 30‐fold higher affinity of Ubp8C146A for ubiquitin. We show that an alternative option, substituting the active site cysteine with arginine, can inactivate DUBs while also decreasing the affinity for ubiquitin.
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DOI：
10.1038/nrd.2017.152
发表时间：
2018-01
期刊：
Nature reviews. Drug discovery
影响因子：
--
作者：
Harrigan JA;Jacq X;Martin NM;Jackson SP
通讯作者：
Jackson SP
影响因子：
16
作者：
Kwasna D;Abdul Rehman SA;Natarajan J;Matthews S;Madden R;De Cesare V;Weidlich S;Virdee S;Ahel I;Gibbs-Seymour I;Kulathu Y
通讯作者：
Kulathu Y
DOI：
10.1107/s0907444904019158
发表时间：
2004-12-01
影响因子：
2.2
作者：
Emsley, P;Cowtan, K
通讯作者：
Cowtan, K
影响因子：
3.9
作者：
Lee, Kenneth K.;Swanson, Selene K.;Workman, Jerry L.
通讯作者：
Workman, Jerry L.
影响因子：
4
作者：
Clague, Michael J.;Coulson, Judy M.;Urbe, Sylvie
通讯作者：
Urbe, Sylvie