Subunit rotation in single FRET-labeled F1-ATPase hold in solution by an anti-Brownian electrokinetic trap
Subunit rotation in single FRET-labeled F1-ATPase hold in solution by an anti-Brownian electrokinetic trap
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单个 FRET 标记的 F1-ATP 酶中的亚基旋转通过反布朗动电陷阱保持在溶液中
DOI：
10.1117/12.2002955
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发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
M. Börsch
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
H. Sielaff;T. Heitkamp;A. Zappe;N. Zarrabi;M. Börsch
FoF 1-ATP合酶催化三磷酸腺苷（ATP）的合成。F1部分可以从酶的膜包埋的F部分剥离。F1作为ATP水解酶，ATP水解与F1的γ和ε亚基的逐步旋转有关。在过去的15年里，使用附着在表面上的单个F1部件对这种旋转运动进行了非常详细的研究。通过结合的荧光肌动蛋白丝、纳米珠或纳米棒或单个荧光团的视频显微镜监测γ的亚基旋转。或者，我们应用单分子Förster共振能量转移（FRET）监测亚基旋转的全酶FoF 1-ATP合酶在脂质体中重建。现在，我们的目标是延长观察时间的单个FRET标记的F1在溶液中使用的反布朗电动势陷阱（ABELtrap）的A. E. Cohen和W. E.莫尔纳我们使用Monte Carlo模拟来揭示逐步FRET效率变化可以通过隐马尔可夫模型来分析，即使在预期由于ABELtrap的微流体引起的高背景计数率而导致的低信号背景比的限制下。
FoF1-ATP synthase catalyzes the synthesis of adenosine triphosphate (ATP). The F1portion can be stripped from the membrane-embedded Foportion of the enzyme. F1acts as an ATP hydrolyzing enzyme, and ATP hydrolysis is associated with stepwise rotation of the γ and ε subunits of F1. This rotary motion was studied in great detail for the last 15 years using single F1parts attached to surfaces. Subunit rotation of γ was monitored by videomicroscopy of bound fluorescent actin filaments, nanobeads or nanorods, or single fluorophores. Alternatively, we applied single-molecule Förster resonance energy transfer (FRET) to monitor subunit rotation in the holoenzyme FoF1-ATP synthase which was reconstituted in liposomes. Now we aim to extend the observation times of single FRET-labeled F1in solution using a modified version of the anti-Brownian electrokinetic trap (ABELtrap) invented by A. E. Cohen and W. E. Moerner. We used Monte Carlo simulations to reveal that stepwise FRET efficiency changes can be analyzed by Hidden Markov Models even at the limit of a low signal-to-background ratio that was expected due to high background count rates caused by the microfluidics of the ABELtrap.
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通过荧光互相关光谱检测活细胞中配体诱导的 CNTF 受体二聚体。
DOI：
10.1016/j.bbamem.2009.05.013
发表时间：
2009
期刊：
Biochimica et biophysica acta
影响因子：
--
作者：
Felix Neugart;Andrea Zappe;Deborah M. Buk;I. Ziegler;S. Steinert;Monika Schumacher;Eva Schopf;Ralph Bessey;K. Wurster;C. Tietz;M. Börsch;J. Wrachtrup;L. Graeve
通讯作者：
L. Graeve
对大肠杆菌 ATP 合酶的保守 β 亚基酪氨酸 331 进行定点诱变可产生具有催化活性的酶。
DOI：
--
发表时间：
1990
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Wise,JG
通讯作者：
Wise,JG
DOI：
10.1073/pnas.1103554108
发表时间：
2011-05-31
影响因子：
11.1
作者：
Fields, Alexander P.;Cohen, Adam E.
通讯作者：
Cohen, Adam E.
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DOI：
10.1107/s1744309112036718
发表时间：
2012
期刊：
Acta crystallographica. Section F, Structural biology and crystallization communications
影响因子：
--
作者：
Roy,Ankoor;Hutcheon,MarcusL;Duncan,ThomasM;Cingolani,Gino
通讯作者：
Cingolani,Gino
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DOI：
10.1016/j.bbabio.2005.03.013
发表时间：
2005
期刊：
Biochimica et biophysica acta
影响因子：
--
作者：
S. Steigmiller;M. Börsch;P. Gräber;M. Huber
通讯作者：
M. Huber