Gene expression from the ORF50/K8 region of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus.
Gene expression from the ORF50/K8 region of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus.
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卡波西肉瘤相关疱疹病毒 ORF50/K8 区域的基因表达。
DOI：
10.1006/viro.1999.9963
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发表时间：
1999
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Quinlivan,EB
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Seaman,WT;Ye,D;Wang,RX;Hale,EE;Weisse,M;Quinlivan,EB
Kaposi肉瘤相关疱疹病毒(KS)的ORF50基因，或人类疱疹病毒8型(KSHV)，激活病毒复制，与疱疹病毒R反式激活因子家族弱同源；因此，KSHV该区域的转录和翻译事件是病毒重新激活的关键事件。我们证明ORF50在病毒裂解周期诱导后以双顺反子的形式表达。ORF50主要以119 kDa和101 kDa的多肽形式迁移。通过3‘端快速扩增、RT-PCR和文库筛选，我们证明ORF50的主要转录本也编码K8。ORF50/K8转录本对环己胺耐药，而K8转录本在早期只对环己胺部分耐药。佛波酯诱导12h后，两种转录本均表现出部分抗性。利用GAL4-ORF50融合蛋白表达载体，我们证明了ORF50的反式激活结构域位于ORF羧基部分的160个氨基酸区域内。在KSHV感染的细胞中，ORF50和K8的上游区域都具有基本的启动子活性。与BZIP蛋白序列同源的K8不能激活这两个启动子。ORF50共转染BCBL-1细胞后，两个启动子均被激活。
The ORF50 gene of Kaposi's sarcoma (KS)-associated herpesvirus, or human herpesvirus 8 (KSHV), activates viral replication and is weakly homologous to the herpesvirus family of R transactivators; therefore, the transcription and translation events from this region of KSHV are key events in viral reactivation. We demonstrate that ORF50 is expressed in a bicistronic message after induction of the viral lytic cycle. ORF50 migrated as a series of polypeptides: the major ones as 119 and 101 kDa, respectively. Using 3′ rapid amplification of cDNA ends, RT-PCR, and cDNA library screening, we demonstrate that the major ORF50 transcript also encodes K8. The ORF50/K8 transcript was resistant to cyclohexamide, whereas the K8 transcript was only partially resistant to cyclohexamide at early timepoints. Both transcripts showed partial resistance after 12 h of phorbol ester induction. Using a GAL4-ORF50 fusion protein expression vector, we demonstrate that the transactivation domain of ORF50 resides within a 160-amino-acid region of the carboxyl portion of the ORF. Upstream regions of both ORF50 and K8 have basal promoter activity in KSHV-infected cells. K8, which had sequence homology to Bzip proteins, did not activate either promoter. However, both promoters were activated after cotransfection of ORF50 in BCBL-1 cells.
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