Activation of mammalian folylpolyglutamate synthetase by sodium bicarbonate.
Activation of mammalian folylpolyglutamate synthetase by sodium bicarbonate.
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碳酸氢钠激活哺乳动物叶酰聚谷氨酸合成酶。
DOI：
10.1016/0003-9861(90)90432-x
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发表时间：
1990
影响因子：
3.9
通讯作者：
McGuire,JJ
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bolanowska,WE;Russell,CA;McGuire,JJ
NaHCO 3 将大鼠肝脏和人白血病细胞系K562和CCRF-CEM的叶酰聚谷氨酸合成酶(FPGS)激活1.7至2.0倍。在所有情况下，10 m m NaHCO 3 均可实现最佳活化； 10 mm 处的 NaCl、甲酸钠、乙酸钠、NaN 3 和 Na 2 SO 3 不会引起活化。如果使用已广泛吸收大气CO 2 的测定溶液，则可能会掩盖激活。详细检查了人类 CCRF-CEM FPGS 的激活。 NaHCO 3 存在时，蝶酰基底物（氨基蝶呤或甲氨蝶呤）和 L-谷氨酸的 K m 和 V max 值成比例增加；因此，与这些底物进行 FPGS 反应的催化效率（V max K m）没有明显变化。然而，NaHCO 3 通过降低其表观K m 同时增加反应的V max 来增加相对于ATP的反应效率。当叶酸、二氢叶酸和四氢叶酸为底物时，NaHCO 3 也激活FPGS活性。添加 NaHCO 3 不会改变 FPGS 由甲氨蝶呤或四氢叶酸合成的产物的相对分布。NaHCO 3 的存在不会改变 5, 8-二脱氮蝶酰鸟氨酸（一种 FPGS 特异性抑制剂）的效力（IC 50 = 0.4 μm）。这些结果表明，叶酸和经典抗叶酸剂的 FPGS 活性可能在生理浓度的 NaHCO 3 下被激活。此外，大气 CO 2 中的碳酸氢盐无意中污染测定溶液可能会导致测定 FPGS 的活性水平和动力学常数时出现伪影。
NaHCO 3 activated the folylpolyglutamate synthetase (FPGS) from rat liver and the human leukemia cell lines K562 and CCRF-CEM by 1.7-to 2.0-fold. Optimal activation was achieved by 10 m m NaHCO 3 in all cases; NaCl, sodium formate, sodium acetate, NaN 3, and Na 2 SO 3 at 10 m m did not cause activation. Activation could be masked if assay solutions which had extensively absorbed atmospheric CO 2 were used. Activation of the human CCRF-CEM FPGS was examined in detail. K m and V max values for pteroyl substrates (aminopterin or methotrexate) and l-glutamate increased proportionally in the presence of NaHCO 3; there was thus no apparent change in the catalytic efficiency (V max K m) of the FPGS reaction with these substrates. However, NaHCO 3 increased the efficiency of the reaction with respect to ATP by decreasing its apparent K m while increasing the V max of the reaction. NaHCO 3 also activated FPGS activity when folic acid, dihydrofolic acid and tetrahydrofolic acid were substrates. The relative distribution of products synthesized from methotrexate or tetrahydrofolate by FPGS was not altered by addition of NaHCO 3. The potency of 5, 8-dideazapteroylornithine, an FPGS-specific inhibitor, was not changed by the presence of NaHCO 3 (IC 50= 0.4 μ m). These results suggest that FPGS activity with folates and classical antifolates may be activated at physiological concentrations of NaHCO 3. In addition, inadvertent contamination of assay solutions with bicarbonate from atmospheric CO 2 may cause artifacts in the determination of activity levels and kinetic constants of FPGS.
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期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
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作者：
Weiss,JH;Choi,DW
通讯作者：
Choi,DW