Stabilities of disulfide bond intermediates in the folding of apamin.
Stabilities of disulfide bond intermediates in the folding of apamin.
复制标题
apamin 折叠中二硫键中间体的稳定性。
DOI：
10.1021/bi00120a026
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发表时间：
1992
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Nelson,JW
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Huyghues-Despointes,BM;Nelson,JW
路易斯安那州州立大学生物化学系，巴吞鲁日，路易斯安那州70803-1806，1991年6月21日接收; 1991年10月23日修订的Mandalpt接收摘要：蜂毒肽是一种18个残基的蜂毒肽，序列为CNCKAPETAL-CARRCQQH-酰胺，含有2个连接Cl至Cl 1和C-3至C-15的二硫键。在还原的未折叠的蜂毒蛋白折叠成具有两个二硫键的天然蜂毒蛋白时，一个二硫键折叠的中间状态未被填充到显著水平。为了研究一个二硫键中间体的性质，我们合成了两个模拟一个二硫键中间体的模型肽阿帕-1和阿帕-2，其中两个半胱氨酸被丙氨酸取代。这些肽只能形成天然二硫键之一，在阿帕-1的情况下为Cl至Cl 1，在阿帕-2的情况下为C-3至C-15。这些二硫键的稳定性已被测量为pH值，尿素浓度和温度的函数，以了解哪些贡献稳定二硫键结构。使用氧化型和还原型谷胱甘肽，在25 ℃和pH 7.0下形成二硫键的平衡常数对于阿帕-1为0.018 M，对于阿帕-2为0.033 M，并且显示出对pH或温度的依赖性很小。在0和8 M尿素之间，两个二硫键均轻微不稳定（约为2倍）。圆二色光谱表明，虽然阿帕-1和阿帕-2都具有一定的结构，但阿帕-2比阿帕-1具有更多的结构。
Department of Biochemistry, Louisiana State University, Baton Rouge, Louisiana 70803-1806 Received June 21, 1991; Revised Manuscript Received October 23, 1991 abstract: Apamin is an 18-residue bee venom peptide with the sequence CNCKAPETAL-CARRCQQH-amide and contains 2 disulfide bonds connecting Cl to Cl 1 and C-3 to C-15. In the folding of reduced, unfolded apamin to native apamin with two disulfide bonds, the one-disulfide folding intermediate states are not populated to significant levels. To study the properties of the one-disulfide intermediates, we have synthesized two peptide models to mimic the one-disulfide intermediates, Apa-1 and Apa-2, in which two cysteines in the sequence have been replacedby alanines. These peptides can form only one of the native disulfide bonds, Cl to Cl 1 in the case of Apa-1 and C-3 to C-15 in the case of Apa-2. The stabilities of these disulfide bonds have been measured as a function of pH, concentration of urea, and temperature, in order to understand which contributions stabilize the disulfide-bonded structures. Using oxidized and reduced glutathione, the equilibrium constants for forming the disulfide bonds at 25 C and pH 7.0 are 0.018 M for Apa-1 and 0.033 M for Apa-2 and show little dependence on pH or temperature. Both disulfide bonds are destabilized slightly (by approximately a factor of 2) between 0 and 8 M urea. Circular dichroism spectra indicate that although both Apa-1and Apa-2 exhibit some structure, Apa-2 exhibits more than Apa-1.
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