A Versatile Method for Viral Transfection of Calcium Indicators in the Neonatal Mouse Brain.
A Versatile Method for Viral Transfection of Calcium Indicators in the Neonatal Mouse Brain.
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DOI：
10.3389/fncir.2018.00056
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发表时间：
2018
影响因子：
3.5
通讯作者：
Portera-Cailliau C
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
He CX;Arroyo ED;Cantu DA;Goel A;Portera-Cailliau C
啮齿动物出生后的前三周是感官体验推动大脑回路成熟的时期，这是一个尚未完全理解的重要过程。在这个依赖经验的电路组装和可塑性的关键时期的改变有助于几种神经发育障碍，如自闭症，癫痫和精神分裂症。因此，在这段时间内记录网络活动和追踪神经元连接的技术对于描绘典型发育中的回路细化以及疾病中的偏离是必要的。钙成像与GCaMP6和其他遗传编码的指标正在迅速成为首选的方法，用于记录在单突触和单细胞水平的网络活动在体内，特别是在遗传鉴定的神经元群体。我们描述了一个协议，皮质内注射重组腺相关病毒在P1新生小鼠，并证明其使用的纵向成像GCaMP6s在相同的神经元在几个星期内，以表征皮质网络活动的发展desperzization。我们的方法非常适合在出生后早期从突触到整个网络的神经元活动的慢性体内双光子钙成像。
The first three postnatal weeks in rodents are a time when sensory experience drives the maturation of brain circuits, an important process that is not yet well understood. Alterations in this critical period of experience-dependent circuit assembly and plasticity contribute to several neurodevelopmental disorders, such as autism, epilepsy, and schizophrenia. Therefore, techniques for recording network activity and tracing neuronal connectivity over this time period are necessary for delineating circuit refinement in typical development and how it deviates in disease. Calcium imaging with GCaMP6 and other genetically encoded indicators is rapidly becoming the preferred method for recording network activity at the single-synapse and single-cell level in vivo, especially in genetically identified neuronal populations. We describe a protocol for intracortical injection of recombinant adeno-associated viruses in P1 neonatal mice and demonstrate its use for longitudinal imaging of GCaMP6s in the same neurons over several weeks to characterize the developmental desynchronization of cortical network activity. Our approach is ideally suited for chronic in vivo two-photon calcium imaging of neuronal activity from synapses to entire networks during the early postnatal period.
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