Characterization of Tail Sheath Protein of N4-Like Phage phiAxp-3.
Characterization of Tail Sheath Protein of N4-Like Phage phiAxp-3.
复制标题
N4 样噬菌体 phiAxp-3 尾鞘蛋白的表征
DOI：
10.3389/fmicb.2018.00450
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发表时间：
2018
影响因子：
5.2
通讯作者：
Zhao X
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhang Z;Tian C;Zhao J;Chen X;Wei X;Li H;Lin W;Feng R;Jiang A;Yang W;Yuan J;Zhao X
无色杆菌噬菌体phiAxp-3是一种N4样噬菌体，特异性识别木糖氧化无色杆菌脂多糖（LPS）作为其受体。PhiAxp-3尾鞘蛋白（TSP，ORF 69）与噬菌体N4的TSP（gp 65）共享54%的氨基酸序列同一性;后者作为受体结合蛋白发挥功能，并与其宿主细菌的外膜受体NfrA相互作用。因此，我们假设ORF 69是phiAxp-3的受体结合蛋白。在本研究中，构建了一系列ORF 69截短变体，以鉴定该蛋白与A.木糖氧化多糖噬菌体吸附和酶联免疫吸附试验表明，TSP的氨基酸795-1195，即，ORF 69（795-1195）是受体和结合所必需的。ORF 69和ORF 69（795-1195）功能的最适温度和pH分别为4/25°C和7。体外细胞毒性试验表明ORF 69和ORF 69（795-1195）对人永生化正常肝细胞系（LO 2;剂量：0.375-12 μg）分别具有毒性和无毒。讨论了这种无毒截短型phiASP-3 TSP的临床应用潜力。
Achromobacter phage phiAxp-3, an N4-like bacteriophage, specifically recognize Achromobacter xylosoxidans lipopolysaccharide (LPS) as its receptor. PhiAxp-3 tail sheath protein (TSP, ORF69) shares 54% amino acid sequence identity with the TSP of phage N4 (gp65); the latter functions as a receptor binding protein and interacts with the outer membrane receptor NfrA of its host bacterium. Thus, we hypothesized that ORF69 is the receptor-binding protein of phiAxp-3. In the present study, a series of ORF69 truncation variants was constructed to identify the part(s) of this protein essential for binding to A. xylosoxidans LPS. Phage adsorption and enzyme-linked immunosorbent assay showed that amino acids 795–1195 of the TSP, i.e., ORF69(795–1195), are sufficient and essential for receptor and binding. The optimum temperature and pH for the functions of ORF69 and ORF69(795–1195) are 4/25°C and 7, respectively. In vitro cytotoxicity assays showed that ORF69 and ORF69(795–1195) were respectively toxic and non-toxic to a human immortalized normal hepatocyte cell line (LO2; doses: 0.375–12 μg). The potential of this non-toxic truncated version of phiASP-3 TSP for clinical applications is discussed.
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