Activation state-selective kinase inhibitor assay based on ion mobility-mass spectrometry.
Activation state-selective kinase inhibitor assay based on ion mobility-mass spectrometry.
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DOI：
10.1021/ac4012655
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发表时间：
2013-08-06
影响因子：
7.4
通讯作者：
Ruotolo, Brandon T.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Rabuck, Jessica N.;Hyung, Suk-Joon;Ko, Kristin S.;Fox, Christel C.;Soellner, Matthew B.;Ruotolo, Brandon T.
活化状态依赖性激酶抑制剂的发现，其特异性结合蛋白质的非活性构象，被认为是改善癌症治疗的有希望的途径。然而，鉴定这样的抑制剂是具有挑战性的，因为它们可以具有与已知通过与活性形式相互作用来抑制激酶功能的分子相似的Kd值。此外，虽然激酶三级结构内的抑制剂诱导的变化是显著的，但是很少有技术能够完全基于蛋白质-抑制剂复合物形成和局部蛋白质结构的变化以高通量方式正确地分配抑制剂结合模式。我们已经开发了一种新的测定，使用离子迁移率质谱，能够快速检测抑制剂结合和分类所得激酶结合模式。在这里，我们证明了我们的方法分类广泛的激酶抑制剂的能力，使用微克的蛋白质，而不需要蛋白质修饰或标记。
The discovery of activation state dependent kinase inhibitors, which bind specifically to the inactive conformation of the protein, is considered to be a promising pathway to improved cancer treatments. Identifying such inhibitors is challenging, however, because they can have Kd values similar to molecules known to inhibit kinase function by interacting with the active form. Further, while inhibitor induced changes within the kinase tertiary structure are significant, few technologies are able to correctly assign inhibitor binding modes in a high-throughput fashion based exclusively on protein-inhibitor complex formation and changes in local protein structure. We have developed a new assay, using ion mobility-mass spectrometry, capable of both rapidly detecting inhibitor binding and classifying the resultant kinase binding modes. Here, we demonstrate the ability of our approach to classify a broad set of kinase inhibitors, using micrograms of protein, without the need for protein modification or tagging.
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