Efficient nucleic acid detection by templated reductive quencher release.
Efficient nucleic acid detection by templated reductive quencher release.
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DOI：
10.1021/ja904138v
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发表时间：
2009-11-11
影响因子：
15
通讯作者：
Kool, Eric T.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Franzini, Raphael M.;Kool, Eric T.
RNA模板荧光激活是一种核酸检测策略，提供了直接视觉检测活细胞中遗传信息的可能性。在这里，我们描述了一种新的反应策略的荧光激活，其中一个DNA探针上的膦减少了第二个探针上的接头中的叠氮基，导致接头切割和释放的荧光猝灭基团。这些“Q-STAR”探针显示出在约200 nm处产生强荧光开启信号。20分钟，具有非常低的背景和通过在模板上的翻转的显著扩增。一对绿色/红色的这样的探针允许通过它们的16 S rRNA中的单个核苷酸差异来区分两种细菌物种。还原性猝灭剂释放设计的有益性质使得这些探针有希望广泛应用于体外和细胞中核酸检测。
RNA-templated fluorescence activation is a nucleic acid detection strategy that offers the possibility of direct visual detection of genetic information in living cells. Here we describe a new reaction strategy for fluorescence activation, in which a phosphine on one DNA probe reduces an azide group in a linker on a second probe, resulting in linker cleavage and release of a fluorescence quenching group. These “Q-STAR” probes are shown to yield a strong fluorescence turn-on signal in ca. 20 min, with very low background and substantial amplification by turnover on the template. A green/red pair of such probes allowed the discrimination of two bacterial species by a single nucleotide difference in their 16S rRNA. The beneficial properties of the reductive quencher release design makes these probes promising candidates for widespread applications in the detection of nucleic acids in vitro and in cells.
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