Yeast biopanning against site-specific phosphorylations in tau.
Yeast biopanning against site-specific phosphorylations in tau.
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针对 tau 蛋白位点特异性磷酸化的酵母生物淘选。
DOI：
10.1093/protein/gzad005
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Cho,YongKu
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Arbaciauskaite,Monika;Pirhanov,Azady;Ammermann,Erik;Lei,Yu;Cho,YongKu
微管相关蛋白tau位点特异性磷酸化的检测正在成为诊断和监测阿尔茨海默病和其他神经退行性疾病进展的一种手段。然而，目前尚缺乏磷酸化特异性的单抗，对其结合特异性的验证也有限。在这里，我们报告了一种新的方法，使用酵母生物扫描来对抗含有位点特异性磷酸化的合成肽。利用酵母细胞展示先前证实的磷酸-tau(p-tau)单链可变区片段(ScFv)，我们展示了基于抗原上单一氨基酸磷酸化的选择性酵母细胞结合。我们确定了允许使用具有广泛亲和力(Kd=0.2到60 nM)的单链抗体进行磷酸专一性生物扫描的条件。最后，我们通过在6孔板上进行生物扫描，展示了筛选大型文库的能力。这些结果表明，生物泛法可以有效地选择基于磷酸位点特异性抗体结合的酵母细胞，为方便地鉴定高质量的单抗打开了大门。
The detection of site-specific phosphorylation in the microtubule-associated protein tau is emerging as a means to diagnose and monitor the progression of Alzheimer’s Disease and other neurodegenerative diseases. However, there is a lack of phospho-specific monoclonal antibodies and limited validation of their binding specificity. Here, we report a novel approach using yeast biopanning against synthetic peptides containing site-specific phosphorylations. Using yeast cells displaying a previously validated phospho-tau (p-tau) single-chain variable region fragment (scFv), we show selective yeast cell binding based on single amino acid phosphorylation on the antigen. We identify conditions that allow phospho-specific biopanning using scFvs with a wide range of affinities (KD= 0.2 to 60 nM). Finally, we demonstrate the capability of screening large libraries by performing biopanning in 6-well plates. These results show that biopanning can effectively select yeast cells based on phospho-site specific antibody binding, opening doors for the facile identification of high-quality monoclonal antibodies.
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DOI：
10.1152/ajpendo.1984.247.3.e328
发表时间：
1984
期刊：
The American journal of physiology
影响因子：
--
作者：
Young,DB;SmithJr,MJ;Jackson,TE;Scott,RE
通讯作者：
Scott,RE
大鼠血液中的血管紧张素 II 和血管紧张素 III
影响因子：
20.1
作者：
P. Semple;J. Morton
通讯作者：
J. Morton
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DOI：
10.1210/jcem-57-3-482
发表时间：
1983
期刊：
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影响因子：
--
作者：
Naruse,M;Sussman,CR;Naruse,K;Jackson,RV;Inagami,T
通讯作者：
Inagami,T
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影响因子：
56.9
作者：
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通讯作者：
PRATT, JH