Combining isoelectric point-based fractionation, liquid chromatography and mass spectrometry to improve peptide detection and protein identification.
Combining isoelectric point-based fractionation, liquid chromatography and mass spectrometry to improve peptide detection and protein identification.
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DOI：
10.1016/j.jasms.2010.04.010
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发表时间：
2010-09
影响因子：
3.2
通讯作者：
Russell DH
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Cologna SM;Russell WK;Lim PJ;Vigh G;Russell DH
描述了称为等电聚焦和捕获膜分离孔（MSWIFT）的等电捕获装置与基于质谱的蛋白质组学研究的离线耦合。 MSWIFT 是一种高容量、高通量、与质谱兼容的等电捕获装置，可对复杂的肽混合物进行基于等电点 (pI) 的分离。在 MSWIFT 中，分离和分析物捕获是通过使肽离子迁移穿过具有固定 pH 值的膜直至肽 pI 被相邻膜的 pH 值包围来实现的。膜的 pH 值可以调节，从而提供高度的实验灵活性。使用 MSWIFT 进行样品预分级的具体优势包括：(i) 小样品体积 (~200 µl)、(ii) 在较大 pH 范围内定制膜、(iii) 所需级分数量的灵活性、(iv) 膜与各种溶剂系统的兼容性以及 (v) 所得级分在 MS 分析之前不需要进行样品净化。在这里，我们展示了 MSWIFT 在基于质谱的肽检测中的实用性，可改善胰蛋白酶肽高通量分离的动态范围和减少离子抑制效应。
The off-line coupling of an isoelectric trapping device termed membrane separated wells for isoelectric focusing and trapping (MSWIFT) to mass spectrometry-based proteomic studies is described. The MSWIFT is a high capacity, high-throughput, mass spectrometry compatible, isoelectric trapping device that provides isoelectric point (pI) based separations of complex mixtures of peptides. In MSWIFT, separation and analyte trapping are achieved by migrating the peptide ions through membranes having fixed pH values until the peptide pI is bracketed by the pH values of adjacent membranes. The pH values of the membranes can be tuned, thus affording a high degree of experimental flexibility. Specific advantages of using MSWIFT for sample pre-fractionation include: (i) small sample volumes (~200 μl), (ii) customized membranes over a large pH range, (iii) flexibility in the number of desired fractions, (iv) membrane compatibility with a variety of solvents systems and (v) resulting fractions do not require sample cleanup prior to MS analysis. Here, we demonstrate the utility of MSWIFT for mass spectrometry-based detection of peptides in improving dynamic range and the reduction of ion suppression effects for high-throughput separations of tryptic peptides.
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DOI：
10.1073/pnas.74.12.5421
发表时间：
1977-01-01
影响因子：
11.1
作者：
ANDERSON, L;ANDERSON, NG
通讯作者：
ANDERSON, NG
影响因子：
3.4
作者：
Lengqvist, Johan;Uhlen, Kristina;Lehtio, Janne
通讯作者：
Lehtio, Janne
影响因子：
2.9
作者：
EsteveRomero, JS;Bossi, A;Righetti, PG
通讯作者：
Righetti, PG
影响因子：
2.9
作者：
Lim, Peniel;North, Robert;Vigh, Gyula
通讯作者：
Vigh, Gyula
DOI：
10.1016/s0021-9673(00)98550-9
发表时间：
1978-01-01
期刊：
JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY
影响因子：
--
作者：
MARTIN, AJP;HAMPSON, F
通讯作者：
HAMPSON, F