Detection of Novel LAMC2 Mutations in Herlitz Junctional Epidermolysis Bullosa
Detection of Novel LAMC2 Mutations in Herlitz Junctional Epidermolysis Bullosa
复制标题
赫利兹交界性大疱性表皮松解症中新型 LAMC2 突变的检测
DOI：
10.1007/bf03401804
复制
发表时间：
1997
影响因子：
5.7
通讯作者：
J. Uitto
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
L. Pulkkinen;J. McGrath;T. Airenne;H. Haakana;K. Tryggvason;S. Kivirikko;G. Meneguzzi;J. Ortonne;A. Christiano;J. Uitto
背景层粘连蛋白 5 是基底膜透明层内的一种锚定丝附着蛋白，参与交界性大疱性表皮松解症 (JEB) 的发病机制，由三个多肽亚基 α3、β3 和 γ2 链组成，分别由 LAMA3、LAMB3 和 LAMC2 基因编码。为了便于鉴定 LAMC2 的致病突变，开发了一种基于通过 PCR 直接扩增基因组 DNA 或通过 RT-PCR 扩增 mRNA，然后对 PCR 产物进行异源双链分析的策略。材料和方法建立了用于扩增完整 cDNA 以及基因组 DNA 中编码层粘连蛋白 5 的整个 γ2 链的 23 个单独外显子的引物对。用于从基因组 DNA 扩增外显子的引物位于距侧翼内含子序列中的内含子-外显子边界至少 24 bp 处。为了扩增通过 RT-PCR 生成的 cDNA，使用了覆盖 LAMC2 mRNA 整个编码序列的重叠片段的八个引物对。通过构象敏感凝胶电泳 (CSGE) 的异源双链分析，扫描 JEB 患者和无关对照个体中扩增序列的致病性突变和序列变异。结果利用本研究中开发的策略，我们在 3 名患有 JEB Herlitz（致死）变异的患者中鉴定出致病性突变，以及 8 个基因内正常多态性，分别是 对于 LAMC2 基因中的连锁分析很有用。 结论 本研究中描述的方法能够检测 LAMC2 基因中的单碱基替换或小插入和缺失。 JEB 患者中该基因突变的证明进一步强调了层粘连蛋白 5 在提供皮肤基底膜区完整性方面的作用。
BackgroundLaminin 5, an anchoring filament attachment protein within the lamina lucida of the basement membrane zone involved in the pathogenesis of junctional epidermolysis bullosa (JEB), consists of three polypeptide subunits, the α3, β3, and γ2 chains, which are encoded by the LAMA3, LAMB3, and LAMC2 genes, respectively. To facilitate identification of pathogenetic mutations in LAMC2, a strategy based on direct amplification of genomic DNA by PCR or mRNA by RT-PCR, followed by heteroduplex analysis of the PCR products, was developed.Materials and MethodsPrimer pairs for amplification of the complete cDNA as well as the 23 individual exons in the genomic DNA, which encode the entire γ2 chain of laminin 5, were established. The primers for amplification of exons from genomic DNA were positioned at least 24 bp away from the intron-exon borders in the flanking intronic sequences. For amplification of cDNA generated by RT-PCR, eight primer pairs covering overlapping segments of the entire coding sequence of LAMC2 mRNA were used. The amplified sequences were scanned for pathogenetic mutations and sequence variations in JEB patients and unrelated control individuals by heteroduplex analysis by means of conformation sensitive gel electrophoresis (CSGE).ResultsUtilizing the strategy developed in this study, we identified pathogenetic mutations in three patients with the Herlitz (lethal) variant of JEB, and eight intragenic normal polymorphisms, which are useful for linkage analysis, in the LAMC2 gene.ConclusionsThe methodology described in this study is capable of detecting single-base substitutions or small insertions and deletions in the LAMC2 gene. Demonstration of mutations in this gene in JEB patients further emphasizes the role of laminin 5 in providing integrity to the cutaneous basement membrane zone.
登录
查看更多内容
赫利茨交界性大疱性表皮松解症患者 LAMC2 基因纯合外显子跳跃突变的鉴定。
DOI：
10.1111/1523-1747.ep12666027
发表时间：
1995
期刊：
The Journal of investigative dermatology
影响因子：
--
作者：
Vailly,J;Pulkkinen,L;Christiano,AM;Tryggvason,K;Uitto,J;Ortonne,JP;Meneguzzi,G
通讯作者：
Meneguzzi,G
新型层粘连蛋白链（层粘连蛋白 B1k 链）的完整一级结构。
DOI：
--
发表时间：
1994
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Gerecke,DR;Wagman,DW;Champliaud,MF;Burgeson,RE
通讯作者：
Burgeson,RE
由于广泛性萎缩性良性大疱性表皮松解症中编码 β 3 链 (LAMB3) 的基因突变，导致层粘连蛋白 5 表达发生改变。
DOI：
10.1111/1523-1747.ep12605904
发表时间：
1995
期刊：
The Journal of investigative dermatology
影响因子：
--
作者：
McGrath,JA;Pulkkinen,L;Christiano,AM;Leigh,IM;Eady,RA;Uitto,J
通讯作者：
Uitto,J
LAMA3 基因内反复发生的纯合无义突变是巴基斯坦血统患者赫利茨交界性大疱性表皮松解症的原因：奠基者效应的证据。
DOI：
10.1111/1523-1747.ep12346349
发表时间：
1996
期刊：
The Journal of investigative dermatology
影响因子：
--
作者：
McGrath,JA;Kivirikko,S;Ciatti,S;Moss,C;Christiano,AM;Uitto,J
通讯作者：
Uitto,J
Herlitz 交界性大疱性表皮松解症患者 LAMC2 基因中的一种新的纯合无义突变。
影响因子：
3.5
作者：
Baudoin,C;Miquel,C;Gagnoux-Palacios,L;Pulkkinen,L;Christiano,AM;Uitto,J;Tadini,G;Ortonne,JP;Meneguzzi,G
通讯作者：
Meneguzzi,G