Quantitative and label-free technique for measuring protease activity and inhibition using a microfluidic cantilever array.
Quantitative and label-free technique for measuring protease activity and inhibition using a microfluidic cantilever array.
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使用微流体悬臂阵列测量蛋白酶活性和抑制的定量和无标记技术。
DOI：
10.1021/nl8019455
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发表时间：
2008-09
期刊：
影响因子：
10.8
通讯作者：
Majumdar A
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Raorane DA;Lim MD;Chen FF;Craik CS;Majumdar A
我们报告使用的SiNx为基础的金涂层的微悬臂梁阵列定量测量的活性和抑制模型蛋白酶固定在其表面上。胰蛋白酶共价结合到金表面的微悬臂使用合成的间隔，和剩余的暴露的氮化硅表面用硅烷化聚乙二醇钝化。利用激光偏转技术定量测量了胰蛋白酶在基底翻转过程中引起的纳米级悬臂梁运动。这些微悬臂梁偏转直接与过量合成纤连蛋白底物的蛋白酶周转程度相关（KM = 0.58 × 10-6 M）。利用该系统还观察了大豆胰蛋白酶抑制剂（SBTI）对表面固定化胰蛋白酶的抑制作用。
We report the use of a SiNx based gold coated microcantilever array to quantitatively measure the activity and inhibition of a model protease immobilized on its surface. Trypsin was covalently bound to the gold surface of the microcantilever using a synthetic spacer, and the remaining exposed silicon nitride surface was passivated with silanated polyethylene glycol. The nanoscale cantilever motions induced by trypsin during substrate turnover were quantitatively measured using an optical laser-deflection technique. These microcantilever deflections directly correlated with the degree of protease turnover of excess synthetic fibronectin substrate (KM = 0.58 × 10-6 M). Inhibition of surface-immobilized trypsin by soybean trypsin inhibitor (SBTI) was also observed using this system.
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