A High‐Throughput Absolute Quantification of Protein‐Bound Tryptophan from Model and Crop Seeds
A High‐Throughput Absolute Quantification of Protein‐Bound Tryptophan from Model and Crop Seeds
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对模型和作物种子中的蛋白质结合色氨酸进行高通量绝对定量
DOI：
10.1002/cpz1.862
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Angelovici, Ruthie
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ansaf, Huda;Yobi, Abou;Angelovici, Ruthie
本方案描述了芳香族必需氨基酸色氨酸（Trp）的高通量绝对定量方案。该程序包括毫克级碱性水解，然后使用多反应监测串联质谱（LC-MS/MS）检测方法进行绝对定量步骤。该方法通过使用96孔板提取装置每周分析数百份样品。重要的是，该方法每个样品仅使用1.4mg组织，并使用常见的碱性水解方案，然后进行水提取，其中包括L-Trp-d5作为内标物，以实现高精密度，准确度和重现性的结合色氨酸的绝对水平的定量。本文所述的方案已针对拟南芥、大豆和玉米的种子样品进行了优化，但也可应用于其他植物组织。© 2023 Wiley Periodicals LLC.基本方案：分析种子中的蛋白结合色氨酸
This protocol describes a high‐throughput absolute quantification protocol for the aromatic essential amino acid, tryptophan (Trp). This procedure consists of a milligram‐scale alkaline hydrolysis followed by an absolute quantification step using a multiple reaction monitoring tandem mass spectrometric (LC‐MS/MS) detection method. The approach facilitates the analysis of a few hundred samples per week by using a 96‐well plate extraction setup. Importantly, the method uses only ∼4 mg of tissue per sample and uses the common alkaline hydrolysis protocol, followed by water extraction that includesL‐Trp‐d5 as an internal standard to enable the quantification of the absolute level of the bound Trp with high precision, accuracy, and reproducibility. The protocol described herein has been optimized for seed samples forArabidopsis thaliana,Glycine max, andZea maysbut could be applied to other plant tissues. © 2023 Wiley Periodicals LLC.Basic Protocol: Analysis of protein‐bound tryptophan from seeds
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Yobi, Abou;Ansaf, Huda;Angelovici, Ruthie
通讯作者：
Angelovici, Ruthie
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