Use of o-phthalaldehyde assay to determine protein contents of Alhydrogel-based vaccines.
Use of o-phthalaldehyde assay to determine protein contents of Alhydrogel-based vaccines.
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DOI：
10.1016/j.vaccine.2009.07.067
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发表时间：
2009-10-09
期刊：
影响因子：
5.5
通讯作者：
Rausch KM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhu D;Saul A;Huang S;Martin LB;Miller LH;Rausch KM
铝基佐剂(明矾)，包括氢氧化铝(Alwater Gel®)和磷酸铝是美国最常用的佐剂。为了确保疫苗的质量，监管部门要求对最终疫苗产品中的抗原含量进行评估。目前，还没有一种通用的方法来测定明矾疫苗中的蛋白质含量。氢氧化铝凝胶在溶液中以颗粒形式存在，干扰了使用Lowry、BCA或Bradford蛋白质分析等分析方法直接定量配方中的蛋白质含量。本研究采用一种简单的荧光分析方法，使用邻苯二甲醛(OPA)试剂，以准确和灵敏的方式直接测定Alwater Gel®上的抗原含量(不需要提取抗原)。疟疾疫苗候选疫苗AMA1-C1/Alwater Gel、AMA1-C2/Alwater Gel、MSP142-3D7/Alwater Gel、MSP142-C1/Alwater Gel或BSAM-2/Alwater Gel作为模型配方。本研究结果表明，该方法准确度高(87-100%)，重现性好，操作简便，对Alwater Gel®疫苗的线性检测范围为25-400μg/mL(除MSP142-C1外，其线性检测范围为31.25-500μg/mL)。这种检测方法在我们的实验室中被证明是非常有用的，并被用于常规的疫苗质量控制过程。
Aluminum based adjuvants (alum), including aluminum hydroxide (Alhydrogel®) and aluminum phosphate are the most commonly used adjuvant in the US. In order to ensure quality of vaccines, regulatory authorities require evaluation of antigen content in final vaccine products. Currently, there are no generic methods available for the determination of protein content in alum based vaccines. Aluminum hydroxide gels exist as particles in solution, which interfere with direct quantitation of protein content in formulations using assays such as Lowry, BCA or Bradford protein assay. The present study adapts a simple fluorescent assay to directly (without the need for antigen extraction) determine antigen content on Alhydrogel® with accuracy and sensitivity using the o-phthalaldehyde (OPA) reagent. Malaria vaccine candidates AMA1- C1/Alhydrogel, AMA1-C2/Alhydrogel, MSP142-3D7/Alhydrogel, MSP142-C1/Alhydrogel or BSAM-2/Alhydrogel were used as model formulations. The results of the present study show that the OPA assay is highly accurate (87–100%), reproducible, and simple with a linear detection range of 25–400 μg/mL for Alhydrogel® vaccines (except for MSP142-C1, which has a linear detection range of 31.25–500 μg/mL). This assay has proven to be highly useful in our laboratory and been used in routine vaccine quality control processes.
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DOI：
10.1016/j.jchromb.2007.01.002
发表时间：
2007-06-01
影响因子：
3
作者：
Frank, Michael P.;Powers, Robert W.
通讯作者：
Powers, Robert W.
影响因子：
2.2
作者：
KATZ, J
通讯作者：
KATZ, J
影响因子：
2.2
作者：
Zhu, Daming;Huang, Shuhui;Gebregeorgis, Elizabeth;McClellan, Holly;Dai, Weili;Miller, Louis;Sau, Allan
通讯作者：
Sau, Allan
影响因子：
--
作者：
Go, Katrina;Horikawa, Yousuke;Villarreal, Francisco J.
通讯作者：
Villarreal, Francisco J.
影响因子：
2.9
作者：
Hapuarachchi, Suminda;Janaway, Gordon A.;Aspinwall, Craig A.
通讯作者：
Aspinwall, Craig A.