Cold dispase digestion of murine lungs improves recovery and culture of airway epithelial cells.
Cold dispase digestion of murine lungs improves recovery and culture of airway epithelial cells.
复制标题
DOI：
10.1371/journal.pone.0297585
复制
发表时间：
2024
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
气道上皮细胞（AEC）在维持肺内环境稳定、上皮再生和启动肺免疫应答中起着关键作用。为了分离和研究鼠AEC，研究人员通常使用短时间和热（1小时37 ° C）消化方案。在这里，我们提出了一个有效的AEC分离和培养的工作流程，利用长时间和冷（20小时4 ° C）分散酶II消化鼠肺。与建立的1小时37 ° C分散酶II消化相比，该方案产生更多数量的活AEC。使用流式细胞术和免疫荧光显微镜的组合，我们证明，与已建立的方法相比，冷消化允许从鼠肺中回收3倍更高数量的CD45-CD31-EpCAM+细胞。与已建立的方案相比，它们的活力增加，它们可以通过磁激活细胞分选（MACS）以更大数量分离，并且它们在体外产生更大数量的远端气道干细胞（DASC）KRT 5 + p63+集落。我们的研究结果表明，小鼠肺酶消化的温度和持续时间对AEC产量，活力和体外形成集落的能力有相当大的影响。我们相信这个工作流程将有助于研究肺AEC及其在肺生物学中的作用。
Airway epithelial cells (AECs) play a key role in maintaining lung homeostasis, epithelium regeneration and the initiation of pulmonary immune responses. To isolate and study murine AECs investigators have classically used short and hot (1h 37°C) digestion protocols. Here, we present a workflow for efficient AECs isolation and culture, utilizing long and cold (20h 4°C) dispase II digestion of murine lungs. This protocol yields a greater number of viable AECs compared to an established 1h 37°C dispase II digestion. Using a combination of flow cytometry and immunofluorescent microscopy, we demonstrate that compared to the established method, the cold digestion allows for recovery of a 3-fold higher number of CD45-CD31-EpCAM+ cells from murine lungs. Their viability is increased compared to established protocols, they can be isolated in larger numbers by magnetic-activated cell sorting (MACS), and they result in greater numbers of distal airway stem cell (DASC) KRT5+p63+ colonies in vitro. Our findings demonstrate that temperature and duration of murine lung enzymatic digestion have a considerable impact on AEC yield, viability, and ability to form colonies in vitro. We believe this workflow will be helpful for studying lung AECs and their role in the biology of lung.
登录
查看更多内容
影响因子：
64.5
作者：
Kumar PA;Hu Y;Yamamoto Y;Hoe NB;Wei TS;Mu D;Sun Y;Joo LS;Dagher R;Zielonka EM;Wang de Y;Lim B;Chow VT;Crum CP;Xian W;McKeon F
通讯作者：
McKeon F
DOI：
10.1007/978-1-4939-7896-0_6
发表时间：
2018
期刊：
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
影响因子：
--
作者：
Nakano H;Nakano K;Cook DN
通讯作者：
Cook DN
基底样祖细胞：对肺修复中肺泡再生和重塑的综述。
影响因子：
5.9
作者：
Fernanda de Mello Costa M;Weiner AI;Vaughan AE
通讯作者：
Vaughan AE
影响因子：
--
作者：
Vazquez-Armendariz AI;Seeger W;Herold S;El Agha E
通讯作者：
El Agha E
影响因子：
0.8
作者：
Levardon, Hannah;Yonker, Lael M.;Mou, Hongmei
通讯作者：
Mou, Hongmei