Optimized tuning of TALEN specificity using non-conventional RVDs.
Optimized tuning of TALEN specificity using non-conventional RVDs.
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使用非规定RVD对TALEN特异性进行优化调整。
DOI：
10.1038/srep08150
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发表时间：
2015-01-30
影响因子：
4.6
通讯作者：
Duchateau P
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Juillerat A;Pessereau C;Dubois G;Guyot V;Maréchal A;Valton J;Daboussi F;Poirot L;Duclert A;Duchateau P
设计DNA靶向工具，特别是核酸酶时的一个关键特征是特异性。控制和调整这一重要参数的能力代表了这种分子剪刀发展的无价进步。在这里，我们鉴定并表征了具有新的内在靶向特异性特征的新型非常规rvd （ncrvd）。我们进一步报道了一种基于ncrvd的排斥能力（不同核苷酸之间的区别）来控制TALEN靶向的策略。通过实施这样的ncrvd，我们在活细胞中证明了有效促进HBB位点上talen介导的靶标加工和减轻不希望的场外切割的可能性。我们预计，这种方法可以极大地有利于设计核酸酶，特别是在治疗应用和合成生物学。
A key feature when designing DNA targeting tools and especially nucleases is specificity. The ability to control and tune this important parameter represents an invaluable advance to the development of such molecular scissors. Here, we identified and characterized new non-conventional RVDs (ncRVDs) that possess novel intrinsic targeting specificity features. We further report a strategy to control TALEN targeting based on the exclusion capacities of ncRVDs (discrimination between different nucleotides). By implementing such ncRVDs, we demonstrated in living cells the possibility to efficiently promote TALEN-mediated processing of a target in the HBB locus and alleviate undesired off-site cleavage. We anticipate that this method can greatly benefit to designer nucleases, especially for therapeutic applications and synthetic biology.
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