Activity of the Enterococcus faecalis EIIA(gnt) PTS component and its strong interaction with EIIB(gnt).

Activity of the Enterococcus faecalis EIIA(gnt) PTS component and its strong interaction with EIIB(gnt).
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粪肠球菌 EIIA(gnt) PTS 成分的活性及其与 EIIB(gnt) 的强相互作用

DOI:
10.1016/j.bbrc.2009.08.100
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发表时间:
2009
影响因子:
3.1
通讯作者:
Brockmeier
Brockmeier
中科院分区:
生物学4区
文献类型:
--
作者:
Brockmeier

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真细菌可以通过糖特异性磷酸烯醇丙酮酸(PEP)依赖性糖磷酸转移酶系统(PTS)导入并同时磷酸化一系列不同的碳水化合物。在这里,我们报告了来自粪肠球菌的葡萄糖酸特异性 PTS 成分 EIIAgnt 的生化特征及其与 EIIAgnt 的意外强复合物。我们使用动力学测量分析了复合物在磷酰基转移方面的活性,并通过诱变证明 EIIAgnt 的 His-9 对于该过程至关重要,并且最有可能代表 EIIAgnt 的磷酰基载体。通过等温滴定量热法 (ITC)、分析超速离心 (AUC)、非变性凝胶电泳和化学交联实验的结合,我们表明 EIIAgnt 和 EIIBgnt 形成强的 2:2 异四聚体复合物,该复合物似乎在 EIIAgnt 磷酸化后不稳定。
Eubacteria can import and simultaneously phosphorylate a range of different carbohydrates by means of sugar specific phosphoenolpyruvate (PEP) dependent sugar phosphotransferase systems (PTSs). Here, we report the biochemical characterization of the gluconate specific PTS component EIIAgntfrom Enterococcus faecalis and its unexpectedly strong complex with EIIBgnt. We analyze the activity of the complex regarding phosphoryl transfer using kinetic measurements and demonstrate by mutagenesis that His-9 of EIIAgntis essential for this process and represents most likely the phosphoryl group carrier of EIIAgnt. With a combination of isothermal titration calorimetry (ITC), analytical ultracentrifugation (AUC), native gel electrophoresis and chemical crosslinking experiments we show that EIIAgntand EIIBgntform a strong 2:2 heterotetrameric complex, which seems to be destabilized upon phosphorylation of EIIBgnt.
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