A combination of Let-7d, Let-7g and Let-7i serves as a stable reference for normalization of serum microRNAs.
A combination of Let-7d, Let-7g and Let-7i serves as a stable reference for normalization of serum microRNAs.
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Let-7d、Let-7g 和 Let-7i 的组合可作为血清 microRNA 标准化的稳定参考
DOI：
10.1371/journal.pone.0079652
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发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Zhang CY
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chen X;Liang H;Guan D;Wang C;Hu X;Cui L;Chen S;Zhang C;Zhang J;Zen K;Zhang CY
最近的研究表明，血清和血浆中的循环microRNAs（miRNAs）是稳定的，可以作为许多人类疾病的生物标志物。然而，以足够的灵敏度和精确度测量循环miRNAs面临着一些特殊的挑战，其中适当的归一化是最关键的，但往往是一个未被充分认识的问题。本研究的主要目的是鉴定在各种条件下保持一致水平的内源性参考基因，以作为定量血清miRNA的内部对照。我们开发了一种策略，结合Illumina的合成测序（SBS）技术，逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR）分析，文献筛选和统计分析，以筛选和验证最合适的参考基因。选择let-7 d、let-7 g和let-7i的组合作为血清miRNA标准化的参考，并且其在统计学上上级于常用的参考基因U6、RNU 44、RNU 48和miR-16。这对正确的实验设计和准确的数据解释具有重要意义。
Recent studies have indicated that circulating microRNAs (miRNAs) in serum and plasma are stable and can serve as biomarkers of many human diseases. Measurement of circulating miRNAs with sufficient sensitivity and precision, however, faces some special challenges, among which proper normalization is the most critical but often an underappreciated issue. The primary aim of this study was to identify endogenous reference genes that maintain consistent levels under various conditions to serve as an internal control for quantification of serum miRNAs. We developed a strategy combining Illumina’s sequencing by synthesis (SBS) technology, reverse transcription quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) assay, literature screening and statistical analysis to screen and validate the most suitable reference genes. A combination of let-7d, let-7g and let-7i is selected as a reference for the normalization of serum miRNAs and it is statistically superior to the commonly used reference genes U6, RNU44, RNU48 and miR-16. This has important implications for proper experimental design and accurate data interpretation.
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