23Na NMR spectroscopy of proximal tubule suspensions.
23Na NMR spectroscopy of proximal tubule suspensions.
复制标题
近端小管悬浮液的 23Na NMR 光谱。
DOI：
10.1038/ki.1986.61
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发表时间：
1986
影响因子：
19.6
通讯作者：
Gupta,RK
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kumar,AM;Spitzer,A;Gupta,RK
近端小管悬浮液的23 Na NMR光谱。用核磁共振波谱法测定了大鼠肾近端小管细胞内钠离子浓度。本文介绍了一种制备近曲小管悬液的简便方法。光学显微镜检查显示这些制剂含有93.6 ± 0.6%（N = 5）近端小管，电子显微镜检查表明小管开放。当与台盼蓝孵育五分钟时，只有2%的小管吸收了染料。基础耗氧率为0.42 ± 0.01 µl min-1 mg protein-1（N = 6）。添加琥珀酸盐（5 mM）导致氧消耗速率增加五倍。23 Na光谱在近端小管中获得，在水性移位试剂三聚磷酸镝Dy（PPPi）27-中孵育30分钟。NMR可观察到的钠浓度在室温下为34.1 ± 1.8 mM，在37 ℃下为16.3 ± 0.6 mM（P < 0.001）。与基础浓度相比，在37°C加入哇巴因（10- 4 M）导致细胞内钠浓度增加至30.9 ± 2.9mM（P < 0.001），而制霉菌素使钠浓度增加至72.0 ± 9.1mM（P < 0.001）。因此，NMR允许在基础条件下测量近端小管中钠的细胞内浓度，并在相同的制备中监测在各种实验条件下发生的变化，而不干扰细胞的形态完整性。
23Na NMR spectroscopy of proximal tubule suspensions. Intracellular sodium concentrations in proximal tubule suspensions of rat kidney were measured by NMR spectroscopy. A simple method for the preparation of proximal tubule suspension is described. Examination by light microscopy revealed these preparations to contain 93.6 ± 0.6% (N = 5) proximal tubules, and electron microscopy demonstrated that the tubules were open. When incubated with trypan blue for five min, only 2% of tubules picked-up the dye. The basal oxygen consumption rate was 0.42 ± 0.01 µl min-1mg protein-1(N = 6). Addition of succinate (5 mM) resulted in a fivefold increase in the rate of oxygen consumption. The23Na spectra were obtained in proximal tubules incubated for 30 min in the aqueous shift reagent dysprosium tripolyphosphate Dy(PPPi)27-. The NMR observable sodium concentration was 34.1 ± 1.8 mM at room temperature and 16.3 ± 0.6 mM (P < 0.001) at 37°C. Addition of ouabain (10-4M) at 37°C resulted in an increase in intracellular sodium to 30.9 ± 2.9 mM (P < 0.001), while nystatin increased the concentration of sodium to 72.0 ± 9.1 mM (P < 0.001), compared to basal concentration. Thus NMR permits the measurement of intracellular concentration of sodium in proximal tubules under basal conditions and to monitor, in the same preparation, the changes that occur under various experimental conditions without interfering with the morphologic integrity of the cells.
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J. Robinson
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