Entwicklung Aptamer-basierter Methoden zur Detektion und Aufreinigung rekombinanter Proteine in der Biotechnologie

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Die Produktion vieler biologisch aktiven Substanzen gelingt in der Biotechnologie mit Hilfe von Zellkulturtechniken. Die Proteine werden dabei in Mikroorganismen oder Säugertierzellen produziert. Dadurch ergibt sich häufig eine hohe Komplexität des Rohproduktes, welches das gewünschte Zielprotein oft nur als Minorkomponente enthält. Vor diesem Hintergrund werden effektive und sensitive Methoden zur Detektion und Aufreinigung der Zielproteine notwendig. Ziel des vorliegenden Forschungsprojektes ist daher die Bereitstellung neuartiger Aptamerbasierter Methoden zur Detektion sowie zur effektiven und schonenden Aufreinigung der Zielproteine. Dabei sollen zwei große Gruppen der rekombinanten Proteine erfasst werden: I) Antikörper: Es wird im Rahmen der geplanten Arbeiten ein Aptamer gegen das Fc- Fragment von Antikörpern bereitgestellt sowie Methoden zur Aptamer-basierten Detektion und Aufreinigung der Antikörper aus Zellkulturproben etabliert. II) Fusionsproteine: Bei diesen Proteinen wird ein so genannter Tag an das Protein fusioniert. Häufig findet dabei der His-Tag Anwendung. Im Rahmen der geplanten Arbeiten werden Aptamere gegen den His- Tag als Affinitätselement zur Entwicklung von Detektions- und Aufreinigungsmethoden verwendet. Darüber hinaus sollen Aptamere gegen den GST-Tag eingesetzt werden.