The role of the lysine-5-hydroxylase Jmjd6 for splicing

Der von Fadok等人于2000年在jj6年的研究中检测了假定的磷脂酰丝氨酸受体（PSR）在体内的作用（Fadok等人，2000）。也就是说，这样的大小，可以通过膜受体表。他处理了一种蛋白质：Protein aus der jumonji - family， die in den letzten Jahren dadurch Aufmerksamkeit erlangte, die sie einige Histonlysyldemethylasen beherbergt, die f<s:1> die chroinmodifikationen eine Rolle spielen。[j] [j] [j] [j] [j] [j] [j] [j] [j] [j] [j] [j]。风的高度是高度。Das Protein at große Ähnlichkeit mit der aspartathyhydroxylase FIH-1, deren substrate der“Hypoxia induced”transcriptionsaktor ist, der die Antwort der Zelle auf Sauerstoffmangel beestimum （Cikala et al., 2004）。在unserem letzten Antrag zu dieser Thematik （BO1748/3-3）中，与她的研究基础有关，通过Jmjd6 eine ähnliche Enzymaktivität，研究了羟基化蛋白和赖氨酸。U2AF-65 ß因子。Wir具有高分子量、高分子量的U2AF-65、Jmjd6和Lys 15、Lys 276和Lys 290。研究了HeLa-Zellen和Resten羟化剂中的内源性U2AF-65。Damit habben是一种研究赖氨酸羟化和夜间代谢蛋白的新方法。Unsere Beobachtung, dass die Herunterregulation von j2af -65 enenen eninbaren .， lässt sich seiner Funktion als U2AF-65 modifizierendes酶vereinbaren。auß - erdem vermuten wir nun einen Zusammenhang zwischen der Aktivität von Jmjd6 und dem splei ß - en， durch den wahrscheinlich der stark entwicklungsgeschädigte Phänotyp von Jmjd6 knockout Mäusen and knockdown斑马鱼（见（Wolf et al., 2007）） erklärt werden könnte。研究结果表明，溶血素-5-羟基lierung与Kernproteinen之间存在着相互作用，而与premrnas之间存在着相互作用。[2] U2AF-65与silac的实验研究。Anschließend wollen wir Spleißeosomen isolieren and in einem proteomisischen Ansatz feststeen, welche anderen Proteine ort von Jmjd6 and Lysinresten hydroxyliert vorliegen。Drittens wollen wir Spleißvarianten detektierende microarrays durchfhren und untersuchen, welche Gene ihr Spleißen verändern, wenn Jmjd6 fehlt der <e:1> berexprimiert wind。Zuletzt wollen wir den Mechanismus untersuchen, durch den die Hydroxylierung von Spleißfaktoren das Spleißen verändert。

Der von Fadok et.al im Jahre 2000 entdeckte putative Phosphatidylserinrezeptor (PSR) wurde inzwischen in Jmjd6 umbenannt (Fadok et al., 2000). Es hat sich gezeigt, dass er kein Membranrezeptor ist. Es handelt sich um ein Protein aus der Jumonji-Familie, die in den letzten Jahren dadurch Aufmerksamkeit erlangte, dass sie einige Histonlysyldemethylasen beherbergt, die für die Chromatinmodifikationen eine Rolle spielen. Jmjd6 ist, trotz einer dies behauptenden Publikation (Chang et al., 2007), keine Histondemethylase. Das wird im folgenden gezeigt. Das Protein hat große Ähnlichkeit mit der Aspartathydroxylase FIH-1, deren Substrat der „Hypoxia induced“ Transkriptionsfaktor ist, der die Antwort der Zelle auf Sauerstoffmangel bestimmt (Cikala et al., 2004). In unserem letzten Antrag zu dieser Thematik (BO1748/3-3) haben wir herausgefunden, dass Jmjd6 eine ähnliche Enzymaktivität hat, es hydroxyliert Proteine an Lysinresten. Ein Zielprotein ist dabei der Spleißfaktor U2AF-65. Wir haben gezeigt, dass U2AF-65 von Jmjd6 gebunden und an Lys 15, Lys 276 and Lys 290 hydroxyliert wird. Wir konnten auch nachweisen, dass endogenes U2AF-65 in HeLa-Zellen an diesen Resten hydroxyliert ist. Damit haben wir zum ersten Mal eine Lysinhydroxylierung an nicht-sezernierten Proteinen beschrieben. Unsere Beobachtung, dass die Herunterregulation von Jmjd6 einen Einfluss auf das alternative Spleißen von Reportergenen hat, lässt sich mit seiner Funktion als U2AF-65 modifizierendes Enzym vereinbaren. Außerdem vermuten wir nun einen Zusammenhang zwischen der Aktivität von Jmjd6 und dem Spleißen, durch den wahrscheinlich der stark entwicklungsgeschädigte Phänotyp von Jmjd6 knockout Mäusen und knockdown Zebrafischen (reviewed in (Wolf et al., 2007)) erklärt werden könnte. Mit diesem Antrag wollen wir die Bedeutung der Lysin-5-Hydroxylierung von Kernproteinen für das Spleißen von Pre-mRNAs weiter untersuchen. Zuerst wollen wir die Hydroxylierung von U2AF-65 mithilfe von SILAC-Experimenten unter verschiedenen Bedingungen quantifizieren. Anschließend wollen wir Spleißeosomen isolieren und in einem proteomischen Ansatz feststellen, welche anderen Proteine dort von Jmjd6 an Lysinresten hydroxyliert vorliegen. Drittens wollen wir Spleißvarianten detektierende Mikroarrays durchführen und untersuchen, welche Gene ihr Spleißen verändern, wenn Jmjd6 fehlt oder überexprimiert wird. Zuletzt wollen wir den Mechanismus untersuchen, durch den die Hydroxylierung von Spleißfaktoren das Spleißen verändert.