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Lumineszente ATP-sensitive Sonden für die Aktivitätsbestimmung von Enzymen

用于测定酶活性的发光 ATP 敏感探针

基本信息

批准号：
18142068
负责人：
Professor Dr. Michael Schäferling
金额：
--
依托单位：
Lehr- und Forschungsgebiet Photonische Materialien
依托单位国家：
德国
项目类别：
Research Grants
财政年份：
2006
资助国家：
德国
起止时间：
2005-12-31 至 2011-12-31
项目状态：
已结题

来源：
https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/18142068?language=en
关键词：
Lumineszente ATP sensitive Sonden die

项目摘要

Ziel des Projekts ist die Entwicklung und Erprobung einer neuen Methode zur fluoreszenten Detektion verschiedener enzymatischer Phosphorylierungsreaktionen, die in der pharmazeutischen Wirkstoffforschung und in der klinischen Chemie eine wichtige Rolle spielen. Dies beinhaltet beispielsweise das Screening nach Regulatoren für die Kinase-, Phosphatase- bzw. Phosphodiesteraseaktivität, oder Testmethoden, um die Aktivierung der cAMP-Synthese (cyclisches Adenosinmonophosphat) zu untersuchen. All diese Tests werden beim ¿High-Throughput Screening (HTS) in der Mikrotiterplatte mittels aufwändiger immunodiagnostischer oder enzymatischer Verfahren durchgeführt, die entweder einen spezifischen Antikörper gegen einen der gebildeten Produkte enthalten (z.B. anti-cAMP) oder diese in gekoppelten enzymatischen Reaktionen nachweisen.Im Rahmen dieses Projekts sollen Fluoreszenz-Assays entwickelt und optimiert werden, die den Umsatz von ATP unter Bildung von ADP bzw. cAMP direkt ohne Zugabe von Antikörpern (oder gekoppelter enzymatischer Indikatorreaktionen) anzeigen und damit die Bestimmung der Aktivitäten der an diesen Umsetzungen beteiligten Enzyme (bzw. die Untersuchung deren Hemmung oder Aktivierung) ermöglichen. Als Indikator dient dabei ein Europium-Tetracyclin-Komplex [Eu(Tc)], dessen freie Koordinationsstellen reversibel von zusätzlichen Liganden, wie z.B. Phosphatgruppen, abgesättigt werden können. Dabei treten sowohl spezifische Änderungen in der Lumineszenzintensität I als auch in der Lumineszenzlebensdauer ¿ auf.Die Anwendbarkeit dieser einfachen und im Gegensatz zu den immunodiagnostischen oder enzymatischen Tests stark verbilligten Methode soll für verschiedene analytisch relevante Fragestellungen untersucht werden. Schließlich soll für die aussichtsreichsten Anwendungsmöglichkeiten (Screening von Agonisten/ Antagonisten, medizinische Diagnostik, Lebensmittelanalytik) ein optimierter zeitaufgelöster Fluoreszenztest für das HTS erarbeitet und standardisiert werden. Dazu wird ein einfaches und preiswertes Imaging-System für Mikrotiterplatten (MTP) aufgebaut, welches speziell für das Fluorezenz-Lifetime-Imaging des Europium-Tetracyclin-Komplexes geeignet ist.

Ziel des Projekts是一种新的荧光检测方法，用于酶促磷酸化，在药物化学研究和临床化学中发挥重要作用。Dies beinhaltet beispielsweise das Screening nach Regulatoren für die Kinase-，Phosphatase- bzw.磷酸二酯酶活性，或测试方法，um die Aktivierung der cAMP-Synthese（cycloisches Adenosinmonophosphat）zu untersuchen.所有这些测试韦尔登是高通量筛选（HTS）在微滴定板mittels aufwändiger immunodiagnostischer or der enzymatischer Verfahren durchgeführt，die entweder einen spezifischen Antikörper gegen einen der gebildeten Produkte planten（z.B.抗cAMP）或酶反应后的酶反应。在这些项目中，我们对ATP的抑制作用进行了优化。cAMP直接由Antikörpern Zugabe（oder gekoppelter enzymatischer Indikatorreaktionen）anzeigen和damit die Bestimmung der Aktivitäten der an diesen Umsetzungen beteiligten Enzyme（bzw.这些研究都是关于出血或活动的。Als Indikator dient dabei ein Europium-Tetracyclin-Komplex [Eu（Tc）]，dessen freie协调sstellen reversibel von zusätzlichen Liganden，wie z.B.磷酸盐小组，我们韦尔登肯能。Dabei treten sowohl speziophe Änderungen in der Lumineszenzenzlebensität I als auch in der Lumineszenzlebensdauer auf.Die Anwendbarkeit dieser einfachen und im Gegenetzu den immunodiagnostischen oder enzymatischen Tests stark verbilligten Method soll für verbilledene analytisch relevant Fragestellungen untersucht韦尔登. Schließlich soll für die aussichtsreichsten Anwendungsmöglichkeiten（Screening von Agonisten/ Antagonisten，medizinische Diagnostik，Lebensmittelanalytik）ein optimierter zeitaufgelöster Schizenztest für das HTS erarbeitet und Schosiert韦尔登。本文介绍了一种新型的微滴定板（MTP）成像系统，该系统可用于铕-四环素复合物的荧光寿命成像。