Funktionelle Bedeutung der tandemartigen Anordnung der SNARE-Motive in SNAP-25 im Kontext der schnellen, Ca2+-abhängigen Exozytose

Das和der Exozytose beteiligte SNARE（可溶性n -乙酰马来酰亚胺敏感因子附着受体）-Protein SNAP-25 weist - durine tandetige verkn<e:1> pfung von zwei snail - motiven strukturelles Merkmal auf， Das功能良好的wenstanden。Evolutionär scheint aus zwei getrennten membrane verankerten SNARE-Proteinen mit einzelnen snare -Motive in membrane associziertes Protein gebildet worden zu sein, in dem die been Motive <e:1> ber einen mit palmitoylierungsstelen ausgestatteten " Linker " verkn<e:1> pft sin。在此基础上，提出了一种新的体外酶分析方法。“链接器”的特性-结构操纵器，以及模具的功能。”链接器-Länge， Integrität， sowie die相对位置der Palmitoylierungsstellen和der Palmitoylierungsgrad sollen als potentielle Einflußgrößen auf die Sekretionsfähigkeit untersucht werden。Mutierte Snap-25- varianten sollen hierbei in Snap-25-/- Chromaffinzellen mit hilife eines病毒表达系统的实验，um die rekonstierte section mittels zeitlich hochauflösender电生理学家Methoden auf Änderungen in den Freisetzungseigenschaften zu analysieren。研究了一种新型的荧光标记物-荧光标记物snap -25-荧光蛋白。

Das an der Exozytose beteiligte SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive-factor attachment receptor)-Protein SNAP-25 weist durch eine tandemartige Verknüpfung von zwei SNARE-Motiven ein strukturelles Merkmal auf, das funktionell wenig verstanden ist. Evolutionär scheint aus zwei getrennten membranverankerten SNARE-Proteinen mit einzelnen SNARE-Motiven ein membranassoziiertes Protein gebildet worden zu sein, in dem die beiden Motive über einen mit Palmitoylierungsstellen ausgestatteten „Linker“ verknüpft sind. Im hier vorgeschlagenen Projekt sollen die mechanistischen Gründe dieser Anpassung im Kontext der schnellen, regulierten Exozytose analysiert werden. Dazu sollen verschiedene Charakteristika der „Linker“-Struktur manipuliert, und die funktionellen Konsequenzen für die Vesikelfusion untersucht werden. „Linker“-Länge, Integrität, sowie die relative Position der Palmitoylierungsstellen und der Palmitoylierungsgrad sollen als potentielle Einflußgrößen auf die Sekretionsfähigkeit untersucht werden. Mutierte SNAP-25-Varianten sollen hierbei in Snap-25-/-- Chromaffinzellen mit Hilfe eines viralen Expressionssystems exprimiert werden, um die rekonstituierte Sekretion mittels zeitlich hochauflösender elektrophysiologischer Methoden auf Änderungen in den Freisetzungseigenschaften zu analysieren. Lokalisationseffekte aufgrund veränderter Palmitoylierungsmuster sollen anhand von Fluorophor-markierten SNAP-25-Fusionproteinen untersucht werden.