Tailer made-dual directed immunotherapy for pancreatic cancer

膵癌患者iPS細胞からiPSDCsの分化誘導を行い，CTOS cell lineの確立を行った．3名の膵癌患者ドナーの末梢血単核細胞からiPS細胞の樹立を行った．iPS細胞をMatrigelコートしたdishでフィーダーレス培養を行い，5ステップ法でiPSDCsへ分化誘導を行った．膵癌患者iPSDCsとBMDCsの成熟能を比較検討するためにそれぞれの未成熟，成熟DCsにて表面マーカーの発現（CD11c，CD80，CD83，CD40，HLA-ABC，HLA-DR）をflow cytometryにて比較検討した．さらに膵癌患者iPSDCsとBMDCsのサイトカイン分泌能を比較検討するためそれぞれの未成熟，成熟DCsにてサイトカインの分泌（IFN-γ，IL-12p70, TNF-α）をELISA法にて比較検討した．膵癌患者より樹立したiPSDCsはBMDCsと同様にmaturation cocktailにて成熟し，表面マーカーであるCD11c，CD83，HLA-ABCの同程度の発現を認めた. CD80，CD40，HLA-DRについてはiPSDCsにおいて発現が低かった．さらに3名の膵癌患者ドナーよりCTOS法にて，癌スフェロイドを樹立した．ドナーより摘出した癌組織を細断したのちに，Liberase DH solution (Roche Diagnostics)を加え2時間溶解分離した．この溶解過程でsingle cellとならず細胞間接着を維持したままの細胞塊を100μmおよび40μmのcell strainerを用いて回収し，培養することで癌スフェロイドの樹立を行った．3名の膵癌ドナーの癌組織からいずれもCTOSの樹立が可能であった．腫瘍細胞マーカーであるEpCAMの高い発現を確認した．またCD45の発現は認めなかった．3名のドナーのうち1名においてCEAの高い発現を認めた．

膵癌患者iPS細胞からiPSDCsの分化誘導を行い，CTOS cell lineの確立を行った．3名の膵癌患者ドナーの末梢血単核細胞からiPS細胞の樹立を行った．iPS細胞をMatrigelコートしたdishでフィーダーレス培養を行い，5ステップ法でiPSDCsへ分化誘導を行った．膵癌患者iPSDCsとBMDCsの成熟能を比較検討するためにそれぞれの未成熟，成熟DCsにて表面マーカーの発現（CD11c，CD80，CD83，CD40，HLA-ABC，HLA-DR）をflow cytometryにて比較検討した．さらに膵癌患者iPSDCsとBMDCsのサイトカイン分泌能を比較検討するためそれぞれの未成熟，成熟DCsにてサイトカインの分泌（IFN-γ，IL-12p70, TNF-α）をELISA法にて比較検討した．膵癌患者より樹立したiPSDCsはBMDCsと同様にmaturation cocktailにて成熟し，表面マーカーであるCD11c，CD83，HLA-ABCの同程度の発現を認めた. CD80，CD40，HLA-DRについてはiPSDCsにおいて発現が低かった．さらに3名の膵癌患者ドナーよりCTOS法にて，癌スフェロイドを樹立した．ドナーより摘出した癌組織を細断したのちに，Liberase DH solution (Roche Diagnostics)を加え2時間溶解分離した．この溶解過程でsingle cellとならず細胞間接着を維持したままの細胞塊を100μmおよび40μmのcell strainerを用いて回収し，培養することで癌スフェロイドの樹立を行った．3名の膵癌ドナーの癌組織からいずれもCTOSの樹立が可能であった．腫瘍細胞マーカーであるEpCAMの高い発現を確認した．またCD45の発現は認めなかった．3名のドナーのうち1名においてCEAの高い発現を認めた．