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バイオ医薬品生産細胞における老化現象の解明と制御

生物制药生产细胞老化现象的阐明和控制

基本信息

批准号：
21K04794
负责人：
鬼塚正義
金额：
$ 2.58万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、抗体医薬品生産における長期間の動物細胞培養時に生じる細胞の老化現象と生産抗体の品質の関連性の解明を目的としている。R4年度はより本格的な培養のために、2Lスケール培養槽とATFシステムを用いた灌流培養を実施した。培養途中で培地の灌流率(培地交換速度)を変更し、長期培養と共に培地中の栄養源がIgG1抗体生産量および抗体品質に与える影響を解析した。Run1（22日間培養）の灌流培養では培養途中で灌流率(培地交換速度)を変更し、投入する栄養源量を低下させてその影響を解析した。結果、抗体N型糖鎖末端のガラクトシル化が急激に減少し、Fcレセプターへの結合能力が低い抗体が分泌されていた。Run2（39日間培養）では灌流率を一定に保ちつつブリーディング操作により、維持細胞数を変化させながら培養を実施した。維持した生細胞密度に応じて抗体N型糖鎖のガラクトシル化は変化した。2回のRunより、細胞に対する栄養源相対量がN型糖鎖修飾に影響を与えることが示唆された。細胞分裂に応じて老化が進行すると考えられるため、灌流培養などの連続生産では細胞が目的密度に達した後は、細胞が増殖しない条件下で細胞維持することが望ましいとされている。2回のRunから、細胞維持（増殖なし）の条件設定に関する指標を得ることが出来たと評価している。また細胞老化や抗体品質に影響を与えうると想定した各酵素についてスケールアップ培養（100mL）を行った。培養上清ならびに細胞沈殿を保管したので、精製後、酵素活性を測定する。

This study aims to clarify the relationship between cell aging and the quality of antibody production during long-term animal cell culture in the production of antibody drugs. R4 year, the culture of this standard is carried out in 2L culture tank and ATF system. Analysis of the effects of changes in culture perfusion rate (culture exchange rate), long-term culture and culture on IgG1 antibody production and antibody quality Analysis of the effects of changes in perfusion rate (culture exchange rate) and low nutrient input on perfusion culture in Run1 (22 day culture) As a result, the N-type glycosylation of antibody decreased rapidly, and the Fc binding ability decreased. Run2 (39 day culture): Keep perfusion rate constant, maintain cell count, and maintain culture. To maintain the growth cell density, the antibody N-type carbohydrate chain was transformed into a new type of antibody. 2. N-type glycan modification affects the growth and development of cells. Cell division, aging, perfusion culture, cell production, cell maintenance, cell proliferation, cell growth, cell growth 2. The indicators related to the condition setting of Run and cell maintenance (growth) are obtained and evaluated. Cell aging and antibody quality are affected by enzyme culture (100mL). Culture supernatant, cell culture, preservation, purification, enzyme activity measurement

项目成果

期刊论文数量（11）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

動物細胞を利用したタンデム型二重特異性 scFv 抗体の製造適合性評価

使用动物细胞制造串联双特异性 scFv 抗体的适用性评估

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
森田　俊哉;吉本　則子;西岡美玖，西岡美穂，小川紗也香，金山直樹，波多野直哉，徳光浩，曲正樹;福間奈々子，天羽宏枝，伊藤洋一郎，石井純，近藤昭彦，梅津光央，鬼塚正義
通讯作者：
福間奈々子，天羽宏枝，伊藤洋一郎，石井純，近藤昭彦，梅津光央，鬼塚正義

抗体医薬品製造　～基礎から基盤技術開発まで～

抗体药物制造～从基础知识到基础技术开发～