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大腸菌の新規 yafD-yafE TA system の機能同定

新型 yafD-yafE TA 系统在大肠杆菌中的功能鉴定

基本信息

批准号：
21K05347
负责人：
山口良弘
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Osaka Metropolitan University (2022)Osaka City University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

新規 TA system として YafD-YafE を同定し、YafD toxin はRNA ポリメラーゼ活性を阻害することが示唆されている。本研究では、(1) YafD toxin の標的を同定、(2) YafD の標的に対する作用機構、(3) YafE antitoxin によるYafD 毒性中和機構、及び (4) yafD-yafEの生理的役割の解明を目的として実験を行っている。昨年度はYafDタンパク質の可溶化およびyafD 遺伝子のsuppressor gene の取得を試みた。今年度は、suppressor gene の探索の結果得られた2つの大腸菌のゲノム DNA 領域から、suppressor gene の同定を試みた。その結果、ytfP 遺伝子の共発現は YafD による生育阻害を抑制することが示された。一方で、これまでの実験から YafDは RNA 合成を阻害することが示された。今回取得した DNA 領域には RNA ポリメラーゼのオメガ因子である rpoZ が含まれていており、YafD はRpoZ と拮抗阻害して RNA ポリメラーゼと結合することで大腸菌の生育を阻害する可能性が考えられたが、rpoZ 遺伝子は YafD による生育阻害に影響しなかった。YtfP は γ-glutamylamine cyclotransferase family に属する機能未知タンパク質であるため、YafD はアミノ酸合成を阻害していると考えられた。そこで、アミノ酸添加および無添加の M9 合成培地における YafD による生育阻害を解析した結果、アミノ酸の添加は YafD の生育阻害作用を抑制した。よって YafD はアミノ酸合成を阻害していると考えられた。YafD の可溶化タグとして GST、MBPを用いたが、すべて不溶化タンパク質として発現された。

New rules TA system として YafD-YafE を同定し、YafD toxin はRNA ポリメラーゼActivity をHinder することが Show唆されている. The purpose of this study is: (1) YafD toxin is the same as the target, (2) YafD is the target of the action mechanism, (3) YafE antitoxin is the toxicity neutralizing mechanism of YafD, and (4) yafD-yafEのphysiological cutting の Explain the purpose of the として娟験を行っている. Yesterday's annual はYafDタンパク性のsoluble およびyafD 伝子のsuppressor gene のGetをtestみた. This year, the results of the research on suppressor gene are られた2つのcoliform DNA field, and the suppressor gene is determined in the same field.そのRESULT, ytfP 伝子の同発appearは YafD による Fertility retardation を Suppression することが Show された. One side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, and one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one side, one of them, YafD, は, RNA synthesis, hindered, する, ことがshow, された. This time, I got the DNA domain には RNA ポリメラーゼのオメガ factor である rpoZ がcontaining まれていており, YafD はRpoZ とantagonist blocking して RNAポリメラーゼとcombinationすることでEcoliform reproductionの hinderするpossibilityが考えられたが、rpoZ 伝子は YafDによる Fertility retardation and influence しなかった. YtfP γ-glutamylamine cyclotransferase family に gen する function unknown タンパクquality であるため, YafD はアミノacid synthesis を hinder しているとtest えられた.そこで, アミノAcid added および No added の M9 Synthetic soil における YafD によるFertility inhibitor analysis した results, アミノAcid のadded は YafD The fertility-inhibiting effect is also inhibited.よって YafD はアミノAcid synthesis を hinders していると卡えられた. YafD's solubilized タグとして GST, MBP いたが, すべて insoluble タンパク性として発成された.