Structural analysis of cFLIP as an iron-binding protein and elucidation of a new physiological function

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本年度は、大腸菌よりcFLIPのリコンビナント-タンパク質の精製と、リコンビナントを使った生化学的解析を中心に進めた。初段階から単一タンパク質としての精製は困難であることが判明したため、MBPとの融合タンパク質として改良を施すことで結果として精製が可能となった。精製したリコンビナントを使ってFenton反応への抑制効果の有無を調べたところ、抑制作用が認められた。また、cFLIPを発現する大腸菌は、コントロールの細胞に比べて過酸化水素水に対して耐性を示すことが明らかとなった。一方、システイン残基(Cys259)をアラニンに置換したcFLIP変異体を発現する大腸菌の場合は、耐性を失うことも認めた。