ガ類性フェロモン生合成酵素の同定―残された課題への挑戦ー

蛾信息素生物合成酶的鉴定-遗留问题的挑战-

基本信息

批准号：
21K05623
负责人：
石川幸男
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Setsunan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ガ類の性フェロモンは大きくType-I・Type-IIに分類され、これら２タイプの性フェロモンは原材料も生合成経路も大きく異なることが知られている．これまでの研究で性フェロモン生合成酵素の分子的実体は徐々に明らかにされてきたが、未解明のものも多く残されている．本研究では、Type-Iを使用するガの代表としてアワノメイガOstrinia furnacalisを、Type-IIを使用するガの代表としてアメリカシロヒトリHyphantria cuneaを用い、それぞれの性フェロモンの生合成に関わる酵素のうち、未だに未同定のものの解明を目指して研究を行った．研究の進行状況は以下の通りである．１．アワノメイガのアセチル基転移酵素（AT）とアメリカシロヒトリの脱カルボニル酵素（CYP4G）の候補遺伝子について、そのフェロモン生合成に対する関与を検証した．２．前年度の実験でATとCYP4GのdsRNAの蛹への微量注射ではRNAiの効果が認められなかったため、これらの酵素タンパク質を大腸菌で発現させるためのプラスミドの構築を行った．なお、CYP4Gが働くためにはエネルギー供給系であるCYP reductase（CYPR）を共発現させる必要があるため、この遺伝子も同時にプラスミドに組み込んだ。３．ATタンパク質を大腸菌で発現させたところ不溶体を形成してしまい、活性のある形でのタンパク質を得ることができなかった。CYP4GとCYPRについては、現在、大腸菌でのタンパク質の発現を試みている。４．ATについては、バキュロウイルスー昆虫細胞培養系を用いた発現に方法を切り替え、組換えバキュロウイルスの作製に成功した。

飞蛾的性信息素广泛分为I型和II型，众所周知，这两种类型的性信息素的原料和生物合成途径大不相同。先前的研究逐渐揭示了性信息素生物合成酶的分子实体，但许多人仍不清楚。在这项研究中，我们将Awano-Meow ostridia frunacalis用作使用I型I类型的飞蛾的代表，而美国的白色大小Cunea作为使用类型II的飞蛾的代表，以及使用类型-II的美国白尺寸的飞蛾，我们使用了与ENZES的持续性相关性，并指出了各种性行为的作用。确定。研究的进展如下：1。我们检查了候选基因在质子酮生物合成中的质子关系和脱骨酶（CYP4G）中的乙酰基转移酶（AT）的参与。 2。在上一年的实验中，当将AT和CYP4G dsRNA注入p时，未观察到RNAi的作用，因此我们构建了一种在大肠杆菌中表达这些酶蛋白的质粒。此外，为了使CYP4G起作用，有必要共表达CYP还原酶（CYPR），即能源供应系统，因此该基因也同时被纳入质粒中。 3。当以大肠杆菌的形式表达AT蛋白时，形成了不溶性形式，无法获得活性的蛋白质形式。对于CYP4G和CYPR，我们目前正在尝试在大肠杆菌中表达蛋白质。 4。关于AT，该方法使用杆状病毒诱导的细胞培养系统切换为表达，重组杆状病毒的产生成功。