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炎症性疾患に関連する硫酸化糖鎖の生合成制御機構と生物学的意義

炎症性疾病相关硫酸化糖链的生物合成调控机制及生物学意义

基本信息

批准号：
21K06089
负责人：
灘中里美
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kobe Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

がん抑制遺伝子(EXT)ファミリーに属するEXT-like 2 (EXTL2)遺伝子は, 硫酸化グリコサミノグリカン(GAG)の合成を負に調節する. 申請者らは, EXTL2によるGAGの生合成調節機構が働かない場合, 炎症に関連した病態が重篤に現れること, 発生過程で神経前駆細胞の増殖が亢進することを見出しており, EXTL2は炎症を誘発する活性や神経前駆細胞の増殖を促す活性をもつGAG鎖の合成を制御すると考えている. 本研究では, EXTL2によるGAGの生合成調節機構の仕組みとその生物学的意義の解明を目指す.2022年度は、EXTL2の発現制御機構について調べた. EXTL2遺伝子の5’非翻訳領域に結合する転写因子のうち, 炎症に関連するものを検索した. このうち, 炎症に関連する遺伝子やがん関連遺伝子を制御する転写因子CTCFに着目した. マクロファージ系株化細胞をリポ多糖で処理し, CTCF と EXTL2の遺伝子発現が調べたところ, 両遺伝子ともに炎症反応の活性化に伴い低下した. CTCFが EXTL2遺伝子の転写に関与する可能性が示唆された. CTCFの過剰発現は EXTL2遺伝子の発現を上昇させた. 次に, EXTL2遺伝子の5’非翻訳領域をクローニングし, ルシフェラーゼ遺伝子の上流に組み込んだレポーターベクターを構築した. これを用いてレポーターアッセイを行ったところ, 転写領域から-1.9 kbから-3.4 kb のDNA領域がEXTL2遺伝子の転写に関わる可能性が示唆された. また, このDNA領域を組み込んだレポーターベクターは, 発現させたCTCFによりレポーター活性が上昇した. これらの結果から, 炎症反応に伴う CTCF の発現低下がEXTL2遺伝子の発現を低下させる可能性が示唆された。

Ext-like 2 (EXTL2) gene is a negative regulator of sulfation and synthesis of GAG. Applicants argue that EXTL-2 is involved in the regulation of GAG biosynthesis and that inflammation is associated with the development of pathologies and the proliferation of neurons during development. This study aims to clarify the biological significance of the regulatory mechanism of GAG biosynthesis in EXTL2. In 2022, the regulatory mechanism of GAG development in EXTL2 was investigated. EXTL2 gene 5 'non-inverted domain binding factor, inflammation related to the realization of the gene. In this case, inflammation is related to the transmission of genes and related genes, and the control of CTCF is important. The expression of CTCF and EXTL2 gene was regulated by polysaccharide treatment, and the activation of CTCF and EXTL2 gene was decreased. CTCF is the most likely candidate for EXTL2. CTCF's discovery of the EXTL2 gene has increased. Second, EXTL2 is a 5 'non-inverted domain that is constructed by the upstream group of EXTL 2. The possibility of writing EXTL2 gene in DNA domain from-1.9 kb to-3.4 kb is demonstrated. In addition, the DNA domain was organized into groups, and CTCF activity increased. As a result, inflammatory response was accompanied by a decrease in the occurrence of CTCF and a decrease in the possibility of the occurrence of EXTL2.