Elucidation of the pathogenetic mechanisms of congenital diseases caused by the mutations in biosynthetic enzymes of heparan sulfate

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下記の５種類のテーマで実験を行なった。【実験１】グリコサミノグリカン生合成酵素の１つであるキシロース転移酵素について、患者で見つかっている変異型酵素タンパク質の組換え体を作製し、酵素活性の測定を行い、野生型と定量的な比較を行なった。活性の低下が確認でき、学会で成果を発表した。この研究の過程で、２種類のキシロース転移酵素の基質特異性の違いを新たに発見した。現在論文作成中である。【実験２】 EXTL3変異患者由来の不死化した細胞からグリコサミノグリカン鎖を精製し、その含有量、二糖組成、鎖長を調べ、健常人やヘテロ体（父親）由来の細胞のデータと比較し、構造の変化を見出した。【実験３】T細胞特異的Extl3 ノックアウト（KO）マウスの解析：T細胞分化への影響を調べた。マウスから血球を採取し、フローサイトメトリーで解析することにより、CD3、CD4、CD8などの細胞表面抗原の発現を調べ、同腹子の野生型やヘテロ型マウスと比較した。T細胞分化に遅れがあることを発見し、学会で成果を発表した。【実験４】脳特異的Extl3 KOマウスの解析：脳の発達への影響を調べた。オープンフィールド試験、Y-迷路試験、高架式十字迷路試験、新奇物体認識試験などの行動観察実験を実施し、同腹子の野生型やヘテロ型マウスと比較し、短期および物体認知記憶などの脳機能への影響を検証した。明確な差が見られなかったので、さらに遺伝子の半分は完全欠損したマウスも作出し、それらについても同様の解析を行なった。現時点で、有意な差は見られていない。【実験５】腎糸球体特異的Extl3 KOマウスの解析：腎臓のタコ足細胞で特異的にExtl3を欠損したコンディショナルKOマウスを作製した。腎糸球体基底膜のへパラン硫酸に影響が及んでいるのかについて調べた。