Temporal Factorsが神経の運命を決定する分子基盤の理解

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本年度は、昨年度に同定したOPC特異的なSlp1の標的であると考えられるdistal antennaの機能解析を中心に行なった。まず、distal antenna遺伝子の機能抑制実験を行うため、公共のストックセンターからdistal antenna遺伝子の近傍にp因子やpiggyBacが挿入されている系統、さらにdistall antennaの逆向き配列を発現させることによって、RNA干渉を引き起こし得る系統を取り寄せた。技術的に容易なRNA干渉によるdistal antennaの発現抑制実験を行なったが、Slp1以降に発現するTemporal FactorであるDichaete, Bar H1, Taillessのいずれにも発現変化は見られなかった。次に、Slp1陽性幹細胞が生み出す神経への影響を調べたが、こちらも特段の変化は見られなかった。ここで用いたRNA干渉法では、用いた系統によって発現抑制効果が大きく異なる。今回用いた系統では、十分に発現抑制できていない可能性が考えられた。次に、distal antenna遺伝子の近傍にp因子が挿入されている系統を用いて、Temporal Factors、Slp1陽性幹細胞由来の神経への影響を検討した。しかしながら、いずれの場合も変化がみられなかった。今回用いた系統では、distal antenna遺伝子の機能が十分に良くされていないことが考えられる。この結果を受けて、現在、CRISPR-Cas9法を用いて、distal antennaの完全欠損個体の作出に取り組んでいる。