Interaction between organisms in yet-uncultured bacterial community.

尚未培养的细菌群落中生物体之间的相互作用。

基本信息

批准号：
21K06342
负责人：
雪真弘
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

動物の腸内には、多種多様な微生物種が共生しており、それらが相互作用することで、代謝物質などの物質循環を行なっている。現在、複雑な微生物叢の解析においては、メタゲノム解析が主流であるため、個々の微生物の腸内微生物叢での相互作用を直接調べることは困難であり、推察の域を出ない。本研究では、解析対象であるシロアリ腸内細菌種のみをコントロールすることにより、その細菌種がどのように他細菌種と相互作用し、共生系でどのような役割を担っているのか等、腸内での実際の振る舞いを解明する。本研究では、モデルケースとして還元的酢酸生成細菌に必須の葉酸を供給している可能性がある乳酸菌を誘導死する遺伝子組換え体を作製し、腸内微生物叢から乳酸菌のみを取り除いた際の影響を調べ、これまで困難であった難培養微生物間の相互作用を解明することを目的とする。ヤマトシロアリ腸内より単離した乳酸菌Lactococcus reticulitermitis JCM 32106に致死遺伝子を挿入した遺伝子組換え株の作製を試みた。まず、L. reticulitermitisの乳酸菌タンパク質発現ベクターpNZを用いた形質転換系の確立を目指した。エレクトロポレーション法によるベクターの導入法の検討を行なった。各種条件を変更し検討を行なったが、現在まで効率的な形質転換株の取得法の確立には至っていたない。乳酸菌の実験と並行してヤマトシロアリから単離されたEnterobacter sp. に関しても、形質転換株の作製法の確立を目指した。緑色蛍光タンパク質GFPを組み込んだpETベクターを用い、エレクトロポレーション法、ヒートショック法によりEnterobacter sp.への導入を試みた。その結果、形質転換株の取得に成功した。現在、この形質転換株をシロアリに摂食させ、シロアリ腸内に定着可能であるか検証中である。

动物肠道内的各种微生物物种共生，并且随着它们相互作用，它们循环循环循环代谢物和其他物质。当前，宏基因组分析是对复杂微生物群分析的主流，因此很难直接研究肠道菌群中个体微生物的相互作用，而不是推断出来。在这项研究中，通过仅控制靶标的白蚁肠道细菌物种，我们将阐明肠道的实际行为，例如细菌物种如何与其他细菌物种相互作用及其在共生系统中的作用。 This study aims to create a genetically modified organism that induces lactic acid bacteria, which may supply essential folic acid to reductive acetic acid-producing bacteria, as a model case, and investigates the effects of removing only lactic acid bacteria from the gut microbiota, and to elucidate the previously difficult interactions between difficult-to-cultured microorganisms.我们试图产生一种转基因菌株，其中将致死基因插入乳酸菌细菌乳酸菌网状炎JCM 32106从白蚁的肠道分离出来。首先，我们旨在使用乳酸乳杆菌乳酸菌蛋白表达载体PNZ建立转化系统。我们使用电穿孔方法研究了向量的引入方法。已经改变了各种条件，并进行了调查，但是迄今为止，还没有有效的方法来获取转化体。除了对乳酸菌细菌的实验外，我们还旨在建立一种制备转化体的方法。使用结合绿色荧光蛋白GFP的PET载体，我们试图将其引入肠杆菌SP。通过电穿孔和热冲击。结果，转化的菌株被成功获得。当前，这种转化剂是通过白蚁喂养的，并且正在验证以查看是否可以在白蚁肠中殖民。