定量の正確性を担保したターゲットリピドミクス解析法の開発とその臨床的応用

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本研究では，「フルオラスケミストリー」の概念を取り入れた選択的リン脂質抽出法の開発を目的としている。本抽出法を用いることで、例えば血液試料からリン脂質のみを除去することでき、分析対象であるジアシルグリセロール類を、リン脂質によるマトリックス効果を受けることなく、正確にLC-MS装置にて測定できることが可能となる。前年度までに、フルオラス抽出法の基礎的検討を行い、フルオラス溶媒であるパーフルオロアルカン類ならびにリン脂質抽出のための媒体として利用するパーフルオロポリエーテルカルボン酸の選定、ならびに用いる金属類のスクリーニングを行った。さらに市販血液試料を用い、本法のリン脂質除去能ならびにマトリックス効果改善に対する有用性を評価した。これらの結果を踏まえて本年度は、本法の有用性をさらに検証すべく、先ずは内因性ジアシルグリセロールの影響を避ける目的で、安定同位体標識化アシルグリセロールを用いた検証を詳細に行った。試料としては、市販のヒト血清及び血漿への添加サンプルを用いた。真度や再現性、さらにマトリックス効果などを含めた詳細なバリデーションを実施した結果、いずれも満足のいく結果を得ることができた。さらに、健常人より採取した血液試料を用いた検証も行った。本法により抽出の前後での定量結果を確認したところ、抽出前では明らかにマトリックス効果による測定の妨害（ピーク強度の減少や再現性の低下など）を受けていること見られたが、本抽出法を採用することで、それら妨害を受けることなく、内因性ジアシルグリセロールの測定が可能であり、定量の正確性や再現性が大幅に改善できることを示すことができた。