mRNAシーケンスを用いたエンドファイト由来機能性物質の効率的な探索

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2022年度は、1)前年度単離した化合物の培養細胞に対する作用の検証、2)植物内生菌および植物のエキスから新たな化合物の探索、3)植物内生菌ライブラリの拡充を行った。1)これまで単離した化合物の培養細胞に対する作用の検証では、mRNAシーケンスで検討を行う濃度を決定するため、Hep G2細胞、RAW264.7細胞などいくつかの培養細胞に内生菌由来化合物およびヨウシュコバンノキ地下部エキスから単離した化合物を添加し、細胞毒性についてMTTアッセイにより評価した。また、前年度見出したヨウシュコバンノキ地下部エキスから単離した含硫スピロケタール配糖体の抗炎症作用について、これまでのmRNAレベルでの検討に加え、ELISAを用いて炎症性サイトカインのタンパク質レベルでの抑制を確認した。また、免疫細胞染色およびウエスタンブロッティングによりNF-kB経路やMAPキナーゼ経路の関与について検討を行った。2) 植物内生菌および植物のエキスから新たな化合物の探索では、植物内生菌の産生する化合物について検証を進め、ポリケタイドを中心に数種の化合物を単離した。また、検討する化合物に多様性を持たせるため、植物の二次代謝産物についても検討を進め、新規化合物を含む数種の化合物の単離に成功している。この結果については、今後学会等で報告する予定である。3) 植物内生菌ライブラリの拡充では、前年に引き続きフィールドにて植物の採集を行い、そこから植物内生菌を分離培養し菌株ライブラリに約100種の菌株を追加した。