類鼻疽菌の感染力増強因子エルゴチオネインが細胞内で分解されない仕組みの解明

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Burkholderia sp. HME13由来ErtDをHisタグ融合タンパク質として取得し、諸性質を調べた。EDTAを含む緩衝液で透析したErtDはヒダントイン-5-プロピオン酸アミドヒドロラーゼ活性を示さなかった。EDTAで透析したErtDはMn2+、Co2+の添加で大幅に活性を回復し、Mg2+、Fe2+、Ni2+、Zn2+の添加でもわずかに活性を回復させた。これらの結果から、ErtDは金属イオン依存性酵素であることがわかった。Mn2+を含むErtDの安定性、反応に最適な温度とpH、キネティックパラメータを明らかにした。エルゴチオネイン培地で培養したBurkholderia sp. HME13の粗酵素液中にはErtDの活性が検出されるが、LB培地で培養した本菌株の粗酵素液中からはErtDの活性が検出されなかった。また、エルゴチオネイン培地で培養したBurkholderia sp. HME13のertD遺伝子発現量はLB培地で培養した本菌株よりも3.3倍高いことがリアルタイムPCRで明らかになったことから、Burkholderia sp. HME13のErtDはエルゴチオネイン資化に関わることが強く示唆された。Burkholderia sp. HME13のエルゴチオネイン資化に関与すると推定されるErtCのHisタグ融合タンパク質を取得し、本酵素が3-(5-オキソ-2-チオキソイミダゾリジン-4-イル)プロピオン酸デスルフヒドラーゼ活性を持つことを発見し、すでに国際誌で報告済みである。しかし、ErtCの酵素学的諸性質は不明であるため、Hisタグを付加しないNative ErtCを生産する大腸菌株を構築し、本酵素を均一に精製した。また、エルゴチオネイン資化に関与すると推定されるNative ErtEの精製法も確立できたので、現在、これらの酵素の諸性質の解明を試みている。