Identification of host factors interacting with acetylated influenza A virus

本研究は，インフルエンザウイルスのNPに対するアセチル化修飾の生物学的意義を解明することを目的とし，アセチル化されたNPとの相互作用因子を網羅的に解析するものである．手法としては，NPの組換えタンパク質を用いて実験を行う予定だが，本研究室で従来行ってきた大腸菌で組換えタンパク質を作製する方法では，発現させている過程で，どうしてもNPがアセチル化修飾を受けてしまうことが分かっている．そこで，無細胞系組換えタンパク質合成キットであるPUREflexを用いて試験管内で合成を行うことにした．これまでの研究では，インフルエンザウイルスNPの発現プラスミドへのクローニングを完了した．そして，抗NP抗体および抗Streptag抗体を用いたウェスタンブロッティングにより，PUREflexによる発現にも成功したことを確認した．しかし，抗アセチル化リジン抗体を用いた解析を行ったところ，アセチル化酵素と反応させていないにも関わらず，シグナルが確認されてしまった．PUREflexには，アセチル化酵素の類は一切含まれていないことから，抗体の非特異的結合であると考えられるが，現時点では確証はない．そこで，質量分析などで，アセチル化修飾の有無を正確に解析することを視野に入れている．また，インフルエンザウイルスPAのアセチル化修飾に関する論文を発表することができた．宿主側のアセチル化酵素が，PAの19番目のリジン（K19）をアセチル化し，それによってPAエンドヌクレアーゼ活性が増強された。宿主のアセチル化酵素を使ってPAのK19をアセチル化させ，PAエンドヌクレアーゼ活性を増強し，より効率よくウイルスmRNAを合成させているのではないか，という新規な「宿主と病原体との攻防」であると考えられる．加えて，新型コロナウイルスのNタンパク質も，試験管内においてアセチル化を受けることも報告した．

本研究は，インフルエンザウイルスのNPに対するアセチル化修飾の生物学的意義を解明することを目的とし，アセチル化されたNPとの相互作用因子を網羅的に解析するものである．手法としては，NPの組換えタンパク質を用いて実験を行う予定だが，本研究室で従来行ってきた大腸菌で組換えタンパク質を作製する方法では，発現させている過程で，どうしてもNPがアセチル化修飾を受けてしまうことが分かっている．そこで，無細胞系組換えタンパク質合成キットであるPUREflexを用いて試験管内で合成を行うことにした．これまでの研究では，インフルエンザウイルスNPの発現プラスミドへのクローニングを完了した．そして，抗NP抗体および抗Streptag抗体を用いたウェスタンブロッティングにより，PUREflexによる発現にも成功したことを確認した．しかし，抗アセチル化リジン抗体を用いた解析を行ったところ，アセチル化酵素と反応させていないにも関わらず，シグナルが確認されてしまった．PUREflexには，アセチル化酵素の類は一切含まれていないことから，抗体の非特異的結合であると考えられるが，現時点では確証はない．そこで，質量分析などで，アセチル化修飾の有無を正確に解析することを視野に入れている．また，インフルエンザウイルスPAのアセチル化修飾に関する論文を発表することができた．宿主側のアセチル化酵素が，PAの19番目のリジン（K19）をアセチル化し，それによってPAエンドヌクレアーゼ活性が増強された。宿主のアセチル化酵素を使ってPAのK19をアセチル化させ，PAエンドヌクレアーゼ活性を増強し，より効率よくウイルスmRNAを合成させているのではないか，という新規な「宿主と病原体との攻防」であると考えられる．加えて，新型コロナウイルスのNタンパク質も，試験管内においてアセチル化を受けることも報告した．