エンドソーム上でEGFRの分解・リサイクルを決定する新規分子基盤

确定内体上 EGFR 降解和回收的新分子基础

• 批准号: 21K07104
• 负责人: 植村 武文
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07104/
• 关键词: メンブレントラフィック; EGFR; がん; エンドソーム; クラスリンアダプター; 細胞内小胞輸送; クラスリン; ゴルジ体

1. gamma2サブユニットを含むAP-1複合体の機能解析。AP-1複合体のgamma2サブユニットをCRISPR-Cas9システムでノックアウトした正常網膜色素上皮由来のARPE-19細胞を複数得た。ノックアウト細胞でEGFRタンパクの発現量を解析したところ、大きな影響は観察されなかった。これは以前我々が報告したgamma1ノックダウン細胞の表現型（Oncogenesis 2021）と異なるものであった事から、gamma1を含むAP-1複合体とgamma2を含むAP-1複合体とでは機能が異なる可能性が示唆された。2. クラスリンアダプター以外の因子の解析。siRNAスクリーニングで関連因子として候補にあがった遺伝子について解析を進めた。ノックアウト細胞、ノックアウト細胞にGFP融合型遺伝子を発現させたレスキュー細胞を作製した。ノックアウト細胞ではEGFRが初期エンドソームに蓄積するのに対して、レスキュー細胞ではその表現型が戻った。今後この細胞を使用して詳細な解析を進める予定である。3. EGFR-GFPを発現する細胞の作製。EGFR低発現細胞であるMCF7細胞にEGFR（野生型、L858R、T790M+L858R）-GFPをレンチウィルスにより導入し、それらを安定に発現する細胞を作製した。EGFR活性化はp-EGFR抗体で判定した。今後この細胞を使用し、各遺伝子のノックダウンやノックアウトを行っていく予定である。4. 乳がん細胞株SKBR-3においてgamma1に対するshRNAをレンチウィルスにより導入し、安定にgamma1をノックダウンする細胞を作製した。この細胞ではEGFRタンパクの発現低下と増殖能低下が見られた。

1. Function analysis of gamma2 complex containing AP-1. AP-1 complex gamma2 cells were isolated from ARPE-19 cells derived from normal retinal pigment epithelium The analysis of EGFR expression in cells with high molecular weight and high molecular weight The expression pattern of gamma1 and gamma 2 in cells (Oncogenesis 2021) is different. Gamma1 contains AP-1 complex. Gamma2 contains AP-1 complex. 2. Analysis of factors other than the classification parameters. siRNA-related factors may be used to analyze siRNA-related genes. GFP-fused gene development in cell culture The expression pattern of EGFR in the early stages of EGFR accumulation is similar to that in the early stages of EGFR accumulation in the early stages of EGFR accumulation. In the future, the use of cells will be analyzed in detail. 3. EGFR-GFP expression in cells. EGFR (wild-type, L858R, T790M + L858R)-GFP was introduced into MCF7 cells with low EGFR expression, and cells with stable EGFR expression were produced. EGFR activity is determined by p-EGFR antibody. In the future, the cells will be used in a predetermined manner. 4. SKBR-3 cell line contains gamma1 and its shRNA. This cell is not EGFR, but growth and reproduction are low.

项目成果

クラスリンアダプターAP-1複合体によるEGFR発現調節機構

网格蛋白接头 AP-1 复合物对 EGFR 表达的调节

• 发表时间: 2023
• 作者: 植村武文;和栗聡
• 通讯作者: 和栗聡

The UFM1 system regulates ER-phagy through the ufmylation of CYB5R3.

• DOI: 10.1038/s41467-022-35501-0
• 发表时间: 2022-12-21
• 期刊: NATURE COMMUNICATIONS
• 影响因子: 16.6
• 作者: Ishimura, Ryosuke;El-Gowily, Afnan H.;Noshiro, Daisuke;Komatsu-Hirota, Satoko;Ono, Yasuko;Shindo, Mayumi;Hatta, Tomohisa;Abe, Manabu;Uemura, Takefumi;Lee-Okada, Hyeon-Cheol;Mohamed, Tarek M.;Yokomizo, Takehiko;Ueno, Takashi;Sakimura, Kenji;Natsume, Tohru;Sorimachi, Hiroyuki;Inada, Toshifumi;Waguri, Satoshi;Noda, Nobuo N.;Komatsu, Masaaki
• 通讯作者: Komatsu, Masaaki

膜交通によるEGFRの寿命調節機構

膜运输调控EGFR寿命的机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 植村武文;和栗聡
• 通讯作者: 和栗聡

クラスリンアダプターAP-1複合体はEGFR発現を調節する

网格蛋白接头 AP-1 复合物调节 EGFR 表达

• 发表时间: 2022
• 作者: 植村武文;和栗聡
• 通讯作者: 和栗聡

業績［主な研究成果概要］

成果【主要研究成果综述】