Untersuchung des Einflusses der Kultivierungsparameter auf die N- und O-Glykosylierung rekombinanter Proteine in mikroverkapselten Insektenzellen

Die Glykosylierung ist ein entscheidendes Kriterium für die Funktionalität und die Stabilität von pharmazeutischen Proteinen in der medizinischen Anwendung.通过MALDI-QIT-ToF分析，可以有效地研究糖基化对糖基化蛋白表达的影响，包括糖基化浓度、温度、pH值、Nährmedienzusammensetzung、生产力和感染力的影响，以及糖基化蛋白表达的遗传调控。糖基化、糖基化类型和糖基化序列的确定是治疗性表达蛋白韦尔登的重要手段。一个真正的糖基化人类蛋白质将在Säuger-Expressionssystemen erzielt。Das vorliegende Projekt soll daher die Etablierung immobilisierter Insektenzellen als effiziente Alternative eines Expressionssystems für Proteine mit authentischen Glykosylierungsmustern ermöglichen.糖基化韦尔登中的单糖或二糖通过[1- 13 C]-D-葡萄糖、[1 - 13 C]-D-甘露糖、[1 - 13 C]-D-半乳糖和[1- 13 C]-D-乳糖转化为C-。

Die Glykosylierung ist ein entscheidendes Kriterium für die Funktionalität und die Stabilität von pharmazeutischen Proteinen in der medizinischen Anwendung. Der Einfluss der Sauerstoffkonzentration, der Temperatur, des pH-Wertes, der Nährmedienzusammensetzung, des Produkternte- und Infektionszeitpunktes und der genetischen Regulation der Expressionsstärke auf das Glykosylierungsmuster während der Expression rekombinanter Proteine werden durch eine effiziente Glykosylierungsanalyse mittels MALDI-QIT-ToF untersucht. Die dabei gewonnenen Erkenntnisse hinsichtlich der Besetzung der Glykosylierungsstellen, des Glykosylierungstyps und der Glykansequenz soll ausgehend von rekombinanten Musterglykoproteinen auf die Expression therapeutischer Proteine übertragen werden. Eine authentische Glykosylierung humaner Proteine wird derzeit vorrangig in Säuger-Expressionssystemen erzielt. Das vorliegende Projekt soll daher die Etablierung immobilisierter Insektenzellen als effiziente Alternative eines Expressionssystems für Proteine mit authentischen Glykosylierungsmustern ermöglichen. Inwiefern dabei Mono- oder Disaccharide des Mediums in die Glykosylierungen eingebaut werden, wird durch die Zugabe von [1-13C]-D-Glucose, [1-13C]- D-Mannose, [1-13C]-D-Galactose und [1-13C]-D-Lactose als C-Quelle untersucht.