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細胞外ミトコンドリア放出を伝達ツールとした心不全病態悪化の検討及び治療への応用

心力衰竭病理学恶化的检查及其在使用细胞外线粒体释放作为传输工具的治疗中的应用

基本信息

批准号：
21K08141
负责人：
小原幸
金额：
$ 2.41万
依托单位：
Kyoto Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、新生仔ラット培養心筋細胞からの細胞外ミトコンドリア放出と放出ミトコンドリアの障害について検討した。新生仔ラット培養心筋細胞に低酸素再酸素化(H/R)刺激を行い、培養上清を回収した。培養上清中へのミトコンドリア単体放出、あるいはエキソソーム放出を検出する目的で、MitoView green染色DiI染色を各々行った。共焦点レーザー顕微鏡で蛍光染色の確認を行ったところ、MitoView green陽性ミトコンドリア放出は認めたが、DiI陽性小粒子はほとんど認めなかった。心筋細胞への刺激条件や、染色条件を変えて検討したが、いずれも明らかなDiI陽性小粒子は認められなかった。従って、低酸素再酸素化条件では単体としてミトコンドリア放出が主だと考えられた。ミトコンドリア蛍光プローブ以外にも、培養上清中のミトコンドリア放出をミトコンドリア特異タンパクであるTom20のWesternblot法で確認した。H/R刺激後の培養上清においてTom20タンパクの含有量増加が認められた。H/R刺激後の培養上清より遠心分離法で放出ミトコンドリアの分画を得て、新たな培養心筋細胞上清に加えたところ、軽度ではあるが細胞壊死を導き自己心拍のレートの減少が認められ、心筋細胞に対する障害性が観察された。また、新生仔ラット培養心筋細胞において、H/R刺激による障害に対するホノキオールの保護効果を検討した。ホノキオール投与は心筋H/R障害に伴う細胞壊死やアポトーシス細胞死を軽減していた。ホノキオールはH/R刺激に伴う心筋細胞内酸化ストレス増強を軽減していた。その機序にミトコンドリアSIRT3の保持によるSOD2脱アセチル化及び細胞内ATPの保持が認められた。さらに、本薬剤の投与により細胞外ミトコンドリア放出も軽減されていた。

This year, the new generation of cultured cardiac muscle cells from the extracellular matrix release and release of the matrix from the barrier to study Neonatal cultured cardiac muscle cells were stimulated by hypo-acidification (H/R), and culture supernatant was recovered. Culture supernatant, cell release, MitoView green staining, DiI staining, and other methods Confocal Point Microscope: Light Staining Confirmation: MitoView green positive particles The stimulation conditions and staining conditions of cardiac muscle cells are different. The conditions for re-acidification are simple and simple. Western blot analysis of the culture supernatant was performed to confirm the presence of Thom 20. After H/R stimulation, the content of Tom20 in culture supernatant increased. H/R stimulation of culture supernatant after the release of the release To investigate the protective effects of H/R stimulation on cultured cardiac muscle cells The cell death rate is reduced by the H/R barrier. H/R stimulation is accompanied by an increase in intracellular acidification. The mechanism for the release of SIRT3 and the release of SOD2 and the retention of ATP in cells In addition, the release of the drug from the extracellular matrix was also discussed.