小細胞肺癌におけるProx1によるNotch pathwayの制御機構、治療開発

Prox1对小细胞肺癌Notch通路的调控机制及治疗进展

• 批准号: 21K08195
• 负责人: 榊原 純
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08195/
• 关键词: 小細胞肺癌; Prox1; 治療標的

小細胞肺がん細胞株のProx1の発現を確認したところMS-1、H1688，H592，H209,H82,H69でProx1の発現を認めSBC3,SBC5で発現が陰性であった。このためProx1高発現の細胞株であるMS-1を実験に使用しProx1 siRNAでProx1を抑制したところMTT assay、clonogenic assayで細胞増殖がコントロールと比較して増加した。また浸潤能、遊走能をtranswell chabmer法を用いて確認したところProx1 siRNAで増強していた。次にSBC3, SBC5を使用しProx1を強制発現させたところコントロールと比較して細胞増殖能の低下と浸潤能、遊走能の低下を認めた。次にProx1を抑制した場合の関連する分子の蛋白発現をwestern法にて確認したところNotch1-4,下流遺伝子であるHES1, HEY1を含むNotch関連蛋白の発現は予想と反して特に変化を認めなかった。またProx1を強制発現した細胞株においても同様の結果でとなりNotch pathwayとの関連性を認めなかった。neuroblastoma cellsにおいてProx1はp-27 kip1とCdc25Aを直接転写制御しcell cycleや、細胞増に影響を及ぼすことが報告されており（Foskolou IP, et al. Oncogene, 2013）p-27 kip1の蛋白発現とmRANの発現をwesternとRT-PCRにて確認した。MS-1細胞株においてProx1 siRNAによるProx1の抑制はp-27 kip1の発現の低下を認めた。又SBC3, SBC5 のProx1の強制発現細胞株においてはp27の発現が増強していた。さらにcell cycleを確認したところProx1の強制発現細胞株でG1 cell cylce arrestを認めた。

The cell line of small cell lung disease, Prox1 cell line, confirmed that there was no sexual infection in H209, H592, H592, H688, H688, H592, H69, Prox1, H69, SBC3,SBC5. The Prox1 siRNA Prox1 was used to inhibit the growth of MTT assay and clonogenic assay cells in the presence of high Prox1. The transwell chabmer method of immersion and walking energy is used to confirm the strength of the Prox1 siRNA. For the second time, SBC3, SBC5, use Prox1 to stress that the cell fertility is lower than that of the cell, the immersion energy and walking energy are low. The secondary Prox1 suppresses the binding of the molecular protein. The western method confirms that the protein is Notch1-4, the downstream protein is HES1, and the HEY1 contains the Notch protein. The results show that the cell lines are the same as each other. The results show that the Notch pathway cells are linked with each other in the same way. Neuroblastoma cells