Analysis of mechanism of adipose differentiation around hyperplastic parathyroids

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私たちは「副甲状腺細胞の脂肪細胞への分化転換の機序を明らかにし、過形成副甲状腺とその周囲に蓄積する脂肪組織の関係性を解明する」ため、in vitro での分化転換現象の再現を試みたが、現在のところ脂肪細胞分化は検出できていない。これは、実験に耐える副甲状腺細胞の株細胞がなく、初代培養を使わざるを得ないからである。副甲状腺細胞は株化が難しいことで知られており、初代培養も培養下へ移すとすぐに分裂能を消失してしまうため、脂肪細胞への分化転換が進まないと考えられた。そこで本年度は、副甲状腺細胞をiPS化した細胞を再び副甲状腺に分化させ、細胞が分裂能を維持している間に脂肪細胞へ分化させることを試みた。具体的には、ヒト副甲状腺細胞より作製されたiPS細胞を副甲状腺細胞に再分化させる過程で脂肪細胞への分化転換を誘導することとし、本年度はiPS細胞を副甲状腺細胞に分化させる系の確立と改良を行った。ヒト副甲状腺由来のiPS細胞は他研究所で確立したものを譲り受けた。副甲状腺細胞への再分化工程は以下の通りである。iPS細胞から副甲状腺細胞の分化誘導はLawtonらの手法を改良して行った。iPS細胞はまず胚体内胚葉（Definitive Endoderm:DE）に分化させ、それを前方前腸内胚葉（Anterior Forgut Endoderm:AFE）に分化させた。これをさらに咽頭内胚葉（Pharyngeal Endoderm:PE）に分化させた後、最終的に副甲状腺細胞に分化させた。私たちは、AFEの誘導まで既存の肺前駆細胞分化キットを用いることで手間の軽減と期間の短縮を改良した。その後の副甲状腺細胞の再分化は副甲状腺ホルモン（PTH）の産生を指標として確認した。この手法により副甲状腺細胞の再分化を確認できたので、今後、この系を用いて副甲状腺細胞の脂肪分化転換の機序について解析する予定である。