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CXCL12-CXCR4軸による造血幹細胞制御に必須の細胞内分子の網羅的探索

全面寻找CXCL12-CXCR4轴控制造血干细胞所必需的细胞内分子

基本信息

批准号：
21K08393
负责人：
青木一成
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08393/
关键词：
CXCL12 CXCR4 CRISPR 造血幹細胞ニッシェ

项目摘要

CXCL12-CXCR4軸は造血幹細胞や急性白血病細胞の骨髄へのホーミング・骨髄での維持に必須であるが、造血幹細胞や急性白血病細胞においてCXCL12に対する応答性を制御している遺伝子は完全には明らかにされていない。造血幹細胞や急性白血病細胞のCXCL12応答性に必須の細胞内分子を網羅的に探索することを目的として、ゲノムワイドCRISPRスクリーニング技術をin vitroでのマイグレーションアッセイ系に応用した独自の順遺伝学的ゲノムワイドスクリーニングを実施し、既知のCXCR4やRHOAなどに加えて、複数の新規遺伝子を同定することができた。その中の１つの新規遺伝子に注目して解析を進めた。新規遺伝子がCXCL12に対するマイグレーション活性を抑制する分子メカニズムを解明するため、その新規遺伝子を欠失させた急性白血病細胞株を用いてRNA-seq、ATAC-seqを実施したところ、主にエンハンサー領域のクロマチンアクセシビリティが低下すること、その領域には特定の転写因子の結合モチーフが濃縮していること、その転写因子のターゲット遺伝子の発現が低下していることが明らかになった。さらに、アクセシビリティが低下している領域には、CXCR4のエンハンサー領域が含まれ、ChIP-qPCRにより、その領域へのその転写因子の結合が障害されていることが明らかになった。CXCR4のcDNAを過剰発現させると、新規遺伝子欠損により抑制されていたCXCL12に対するマイグレーション活性をレスキューすることができた。また、薬理学的手法を用いて今回同定した新規遺伝子がコードするタンパクの機能を抑制したところ、他の急性白血病細胞株や急性白血病Patient-derived xenografts 細胞でもCXCR4の発現が低下することをわかった。

It is necessary for the maintenance of CXCL12-CXCR4 hematopoietic cells, acute leukemia cells, acute leukemia cells, bone marrow cells, hematopoietic cells, acute leukemia cells, acute leukemia cells, Hematopoietic progenitor acute leukemia cell CXCL12 responsiveness must be linked to the intracellular molecular network. The purpose of this study is to explore the intracellular molecular network. The purpose of this study is to apply the technology of CXCR4, CXCR4, RHOA, and so on. This is not only possible, but also known to be effective. The number of copies of the new specification is the same as that of the new specification. In the middle of this year, the new specification pays close attention to the progress of the analysis. The new specification has been successfully applied to the cell line of acute leukemia using CXCL12, ATAC-seq, and field data. The activity of the new specification has not been verified by molecular analysis, and the new specification is missing. In the field, the specific writing factor is combined with the specific writing factor. in the field, the specific writing factors are combined with the specific writing factors. in the field, the specific writing factors are combined with each other. The field of information includes information, ChIP-qPCR, and information on the field of information, including information, information, etc. The CXCR4 cDNA effect has not been detected, but the new specification does not have any effect on the suppression of the activity of the CXCL12. The methods of treatment and physiology have been used to determine that the new regulation is capable of inhibiting the development of acute leukemia, Patient-derived xenografts cell line of acute leukemia, acute leukemia cell line, acute leukemia