免疫老化現象の回復によるANCA関連血管炎寛解への挑戦

ANCA関連血管炎(AAV）患者の末梢血単核球(PBMCs)を用いた研究。アンチエイジング蛋白であるサーチュイン遺伝子（SIRT1）を賦活化して、CD14陽性細胞から産生されるBAFF、APRILおよびAAV関連病態因子（活性酸素（ROS）や炎症性サイトカイン）の変化の検証実験を継続した。2022年度は、エレクトロポレーション法でCD14陽性細胞にSIRT1を形質移入。形質移入処置後のCD14陽性細胞をリポポリサッカライド（LPS）で刺激培養した後に、①CD14陽性細胞内に発現するSirt1、BAFF、APRIL、ROSをFACSで測定。また、②CD14陽性細胞内に発現する①の各因子（ROSを除く）をmRNAレベルで測定。①②ともに健常コントロール（HC）のCD14陽性細胞に発現する各種因子と比較。以下の結果が得られた。①SIRT1形質移入前に比してROSの発現には低下が示されたが、BAFFおよびAPRILの発現はHCに比して高値であった。②HCに比してmRNAレベルでもBAFFおよびAPRILの発現は高い傾向にあった。③追加で行った実験において、AAVのCD14陽性細胞ではmRNAレベルでSOCS3の発現低下があり、FACSを用いたphospho-flow評価ではリン酸化STATsの亢進傾向あり、SOCS3の発現はBAFFの発現と逆相関の傾向が示された。また、④別途、FACSを用いてB細胞におけるBAFF/APRIL関連受容体（BAFF-R/TACI/BCMA）を測定。④-1) CD14陽性細胞内発現のBAFFおよびAPRILと④との相関は得られなかった。④-2) 血清中のBAFFおよびAPRILをELISAで測定し、④との関連性を解析。血清APRILおよびBAFF-Rの発現が、メモリーB細胞の発現に正の相関を示した。

ANCA関連血管炎(AAV）患者の末梢血単核球(PBMCs)を用いた研究。アンチエイジング蛋白であるサーチュイン遺伝子（SIRT1）を賦活化して、CD14陽性細胞から産生されるBAFF、APRILおよびAAV関連病態因子（活性酸素（ROS）や炎症性サイトカイン）の変化の検証実験を継続した。2022年度は、エレクトロポレーション法でCD14陽性細胞にSIRT1を形質移入。形質移入処置後のCD14陽性細胞をリポポリサッカライド（LPS）で刺激培養した後に、①CD14陽性細胞内に発現するSirt1、BAFF、APRIL、ROSをFACSで測定。また、②CD14陽性細胞内に発現する①の各因子（ROSを除く）をmRNAレベルで測定。①②ともに健常コントロール（HC）のCD14陽性細胞に発現する各種因子と比較。以下の結果が得られた。①SIRT1形質移入前に比してROSの発現には低下が示されたが、BAFFおよびAPRILの発現はHCに比して高値であった。②HCに比してmRNAレベルでもBAFFおよびAPRILの発現は高い傾向にあった。③追加で行った実験において、AAVのCD14陽性細胞ではmRNAレベルでSOCS3の発現低下があり、FACSを用いたphospho-flow評価ではリン酸化STATsの亢進傾向あり、SOCS3の発現はBAFFの発現と逆相関の傾向が示された。また、④別途、FACSを用いてB細胞におけるBAFF/APRIL関連受容体（BAFF-R/TACI/BCMA）を測定。④-1) CD14陽性細胞内発現のBAFFおよびAPRILと④との相関は得られなかった。④-2) 血清中のBAFFおよびAPRILをELISAで測定し、④との関連性を解析。血清APRILおよびBAFF-Rの発現が、メモリーB細胞の発現に正の相関を示した。