The establishment of suitable model for SARS-CoV-2 infection and the analysis of their pathogenicity

SARS-CoV-2感染模型的建立及其致病性分析

• 批准号: 21K08510
• 负责人: 大道寺 智
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08510/
• 关键词: ウイルス感染モデル; 新型コロナウイルス

新型コロナウイルス感染症の流行は未だに収束の見込みはなく、患者数は増え続けている。当該感染症は新興感染症であり、敗血症や血栓症を起こす他、様々な後遺症を残すことも明らかになりつつある。このように感染後の症状に関しては、以前に比べて情報が増えてきた部分もあるが、一方、ウイルスそのものの細胞に対する感染機構、感染動態については未だに不明な点が多い。当該感染症について効果的な治療法の確立が望まれるが、現時点でその治療法は限られている現状がある。当該感染症に対する治療法の開発に加え、診断・予防法の確立のためにもコロナウイルスの詳細な病態解析が重要である。本研究の目的は新型コロナウイルス(SARS-CoV-2)に対する新たな感染モデルを作成し、同ウイルスの感染機構・動態を詳細に解析することである。本年度は感染細胞内におけるウイルス抗原検出系の確立を行った。感染細胞内でのSARS-CoV-2および季節性コロナウイルス(229E)の検出については、それぞれのウイルスに対する特異抗体でのみ検出が可能であったが、季節性コロナウイルス(OC43)についてはウシコロナウイルスをウサギに免疫して作成したポリクローナルでも検出可能であった。一方で、SARS-CoV-2および季節性コロナウイルス(OC43、229E)のそれぞれについて、感染後培養上清中へ放出されるウイルス粒子をリアルタイムPCRで検出するための条件の確立を行った。それぞれのウイルスに対する特異的プライマーとTaqManプローブを作成の上、温度やサイクル数を検討し検出の最適条件を確立した。さらに感染後の培養上清をVreoE6などの感受性細胞株へ接種・培養の後に培養上清中に含まれる感染性ウイルスの数を検出した。ここで得らえた結果と、リアルタイムPCRの結果を比較し、感染性粒子の数とウイルスゲノムコピー数とが相関することを確認した。

The prevalence of new infections has not been reduced, and the number of patients has increased. When the infection is an emerging infection, sepsis, thrombosis, or other sequelae, the infection may be delayed. The symptoms after infection are related to the infection, the previous information is related to the infection, the infection mechanism, the infection dynamics are related to the infection, and the unknown information is related to the infection. When the infection results in the establishment of treatment, the current point of treatment is limited to the status quo Detailed analysis of the disease is important in the development of treatments for this infection, as well as in the establishment of diagnostic and preventive methods. The purpose of this study is to create a new infection model for SARS-CoV-2 and analyze the infection mechanism and dynamics in detail. This year, the establishment of an antigen detection system in infected cells was carried out. Detection of SARS-CoV-2 in infected cells is possible due to seasonal variation of SARS-CoV-2 and SARS-CoV-2 in seasonal variation of SARS-CoV-2 and SARS-CoV-2 (229E). For example, SARS-CoV-2 and SARS-CoV-2 were found to be seasonally different from those detected by PCR (OC43, 229E). The optimum conditions for the preparation of the test results were established. The number of infectious cells in the culture supernatant after inoculation and culture was detected. The number of infectious particles and the correlation between the results of PCR and the number of infectious particles were confirmed.

项目成果

Higher Viral Stability and Ethanol Resistance of Avian Influenza A(H5N1) Virus on Human Skin.

• DOI: 10.3201/eid2803.211752
• 发表时间: 2022-03
• 期刊: Emerging infectious diseases
• 影响因子: 11.8
• 作者: Bandou R;Hirose R;Nakaya T;Miyazaki H;Watanabe N;Yoshida T;Daidoji T;Itoh Y;Ikegaya H
• 通讯作者: Ikegaya H

Double mutations in the H9N2 avian influenza virus PB2 gene act cooperatively to increase viral host adaptation and replication for human infections

• DOI: 10.1099/jgv.0.001612
• 发表时间: 2021-01-01
• 期刊: JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY
• 影响因子: 3.8
• 作者: Elgendy, Emad Mohamed;Arai, Yasuha;Watanabe, Yohei
• 通讯作者: Watanabe, Yohei

Stability of SARS-CoV-2 and influenza virus varies across different paper types.

• DOI: 10.1016/j.jiac.2021.11.006
• 发表时间: 2022-03
• 期刊: Journal of infection and chemotherapy : official journal of the Japan Society of Chemotherapy
• 作者: Hirose R;Miyazaki H;Bandou R;Watanabe N;Yoshida T;Daidoji T;Itoh Y;Nakaya T
• 通讯作者: Nakaya T

A Cytopathic Effect-Based Tissue Culture Method for HCoV-OC43 Titration Using TMPRSS2-Expressing VeroE6 Cells.

• DOI: 10.1128/msphere.00159-21
• 发表时间: 2021-05-12
• 期刊: mSphere
• 影响因子: 4.8
• 作者: Hirose R;Watanabe N;Bandou R;Yoshida T;Daidoji T;Naito Y;Itoh Y;Nakaya T
• 通讯作者: Nakaya T

Hemagglutinin acid stability and infectivity of H5N6/H5N8 avian influenza viruses

H5N6/H5N8禽流感病毒的血凝素酸稳定性和感染性

• 发表时间: 2021
• 作者: Tomo Daidoji;Hiroki Sadakane;Kotaro Garan;Yasuha Arai;Yohei Watanabe;Tatsufumi Usui;and Takaaki Nakaya
• 通讯作者: and Takaaki Nakaya